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标题: 阿替洛尔的HPLC保留时间怪异？ [打印本页]

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 09:46 标题: 阿替洛尔的HPLC保留时间怪异？

求助高人，前段时间建立了HPLC测定阿替洛尔的色谱条件，甲醇和磷酸水为流动相，保留时间约为8min；过了段时间后，该条件就不能重复了。而且无论怎么调整流动相的比例和极性，阿替洛尔都在2.5min出峰，现已经证明不是色谱柱问题，也不是检测器问题，所用溶剂也没问题。这下不晓得该咋个办啦？还望高人指点迷津。

作者: woaifou 时间: 2010-3-27 09:55

楼主，时间变化这么大？
你怎么就肯定2.5min出峰的那个就是你要检测的物质？

作者: header 时间: 2010-3-27 11:12

楼主，考虑一下PH的问题！

作者: 奶苶 时间: 2010-3-27 11:13

离子强度有关么有没有换过其他色谱柱测定看看有什么差别

作者: 灰蓝之海sw 时间: 2010-3-27 12:27

QUOTE:

原帖由 sagalong 于 2010-3-27 09:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
求助高人，前段时间建立了HPLC测定阿替洛尔的色谱条件，甲醇和磷酸水为流动相，保留时间约为8min；过了段时间后，该条件就不能重复了。而且无论怎么调整流动相的比例和极性，阿替洛尔都在2.5min出峰，现已经证明不是色谱柱问题，也不 ...

2.5min太快了吧!!要把它往后延才好!!

作者: chongwenmen 时间: 2010-3-27 14:16

QUOTE:

那就是泵的流速有问题了，测下流速，如果流速没有问题，我觉得问题还是出在色谱柱上面。色谱柱的C18链被打断不少，保留时间自认提前不少。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 15:45 标题: 回复 #6 chongwenmen 的帖子

流速应该是没有问题，因为测试了同时在研究的其他药物，色谱行为正常。
换了柱子试过，还是一样的问题。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 15:47 标题: 回复 #3 header 的帖子

因为随着样品浓度的不同，峰面积不一样啊。而空白也没用这个峰。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 15:50 标题: 回复 #2 woaifou 的帖子

因为随着样品浓度的不同，峰面积不一样啊。而空白也没用这个峰。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 15:51 标题: 回复 #3 header 的帖子

不好意思，刚点错了。我个人觉得应该不是pH的问题，因为大部分文献报道都要求是酸性条件下测定，大约在3左右，我的条件应该是符合的，而其也是以前考察好的色谱条件。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 15:53 标题: 回复 #4 奶苶的帖子

换过色谱柱，结果一样。
不排除有可能是离子强度的影响，但以前都可以实现测定的条件，现在忽然间变得无法理解。

作者: PURPOSE人生 时间: 2010-3-27 15:56

两次肯定有一次做的有问题，很确定一下到底哪次做的出来的峰才是对的，第一次的未必正确，换台仪器，与其它文献比较，看看哪个才是合理的。流动相的组成是什么样的。

药典里已有标准方法，为什么要自己再建立？

作者: 心情se567 时间: 2010-3-27 15:59

请问楼主怎么知道是不是柱子的问题呢？怎么检验的呢，我的也不能重现，并且只在前面有一个峰，而且后面几乎是平的，没有任何痕迹

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 16:51

因为之前做了一个星期的液相，对测定方法做了方法学验证的。所以觉得第一次的应该是没有问题的，而且现在调节流动相的比例，保留时间不移动。

作者: sagalong 时间: 2010-3-27 16:53 标题: 回复 #13 心情se567 的帖子

换了一根柱子，出现同样的情况，这就推测不是柱子的问题

作者: woaifou 时间: 2010-3-27 20:37

QUOTE:

其他药物色谱行为正常，请问流动相比例一样吗？要是不一样，可以肯定的说，是水相的比例非人为的发生变化！

作者: aasle 时间: 2010-3-27 20:39

你方法的耐用性怎么样？

在前后之间，流动相有没有换过厂家？

考虑流动相问题

作者: ross_racheal 时间: 2010-3-28 10:06

如果你这个问题一直是这样，包括更换柱子后，过一段时间你的出峰时间有提前。我猜可能是你的柱子上的固定相和你的样品中一些物质发生反应，到了一定程度时候，柱子性质发生变化，所以保留时间发生变化了！

作者: iTIANMING 时间: 2010-3-28 10:07

QUOTE:

用新配的流动相做做，有的时候流动相用久了估计会出问题的

作者: maomi530 时间: 2010-3-28 10:22

会不会是稳定性的问题。每次都是新制的样品溶液吗？
2.5min会不会是杂质峰，或是分解产物的峰？

作者: sagalong 时间: 2010-3-28 16:07

感谢楼上各位朋友的意见。为了节约时间，就在这里一并解释了。
1、用以前的储备液和新配的溶液进样，结果一样；
2、流动相比例未改变，厂家也未改变，采用新配制流动相反复实验，都是一样的2.5min出峰；
3、如果是药物与色谱柱之间发生反应，导致柱子性能改变，那么更换新柱子应该也要用一段时间才会出现这种问题，但我拿新柱子一试，结果和旧柱子完全一样；

4、我猜测会不会是药物本身已经发生了很大的改变，变成了完全不保留的物质。想在药店买阿替洛尔的片剂来验证一下，但这几天找了附近大大小小的药店，始终没找到。

作者: iwfi325iwc 时间: 2010-3-29 10:47

QUOTE:

原帖由 sagalong 于 2010-3-28 16:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
感谢楼上各位朋友的意见。为了节约时间，就在这里一并解释了。
1、用以前的储备液和新配的溶液进样，结果一样；
2、流动相比例未改变，厂家也未改变，采用新配制流动相反复实验，都是一样的2.5min出峰；
3、如果是药物与色谱柱之间 ...

“而且无论怎么调整流动相的比例和极性，阿替洛尔都在2.5min出峰”，这话怎么理解？

换纯有机相也是2.5min出峰？

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