分析测试百科

标题: HPLC峰分不开，如何调流动相 [打印本页]

作者: iwangfang 时间: 2010-4-9 10:01 标题: HPLC峰分不开，如何调流动相

样品为两种未知中性物质，流动相乙腈：缓冲盐=6：4，缓冲盐PH=4.5，两种物质的峰分不开，应该如何调节流动相？

其中保留时间在51.60min与54.29min的为同一物质，但保留时间在49.91min的物质与其分离效果较差，如何可以提高其分离度？
谢谢！

作者: naren4545 时间: 2010-4-9 10:31

这种情况,调整比例是没用的,考虑更换溶剂和色谱柱吧,要不就彻底更换方法!

作者: woaifou 时间: 2010-4-9 10:41

楼主，调节一下流动相的比例或流速试试看

作者: uwku58h 时间: 2010-4-9 10:41

分离度确实挺差的，一般先调调流动相，不行的话就换细内径的柱子试一试。

作者: aasle 时间: 2010-4-9 11:10

QUOTE:

原帖由 iwangfang 于 2010-4-9 10:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
样品为两种未知中性物质，流动相乙腈：缓冲盐=6：4，缓冲盐PH=4.5，两种物质的峰分不开，应该如何调节流动相？
4114
其中保留时间在51.60min与54.29min的为同一物质，但保留时间在49.91min的物质与其分离效果较差，如何可以提高其分离 ...

分离度和N、K、a有关，先改变一下K、a,最简单就是改变一下流动相，K太大了，你用的是正相还是反相？改变一下流动相使a变大，K尽量小点，时间太长了。

作者: haohaorenjia 时间: 2010-4-9 11:11

为何同一物质会出现两个色谱峰，肯定不是同一物质。

光看到了色谱图，没有色谱条件，神仙也不知道怎么帮你提高分离度。建议楼主说清楚点，大家好帮你。

[ 本帖最后由 miracle 于 2010-4-9 11:47 编辑 ]

作者: LUMGR 时间: 2010-4-9 12:40

不知你用的是什么流动相?

作者: hplcangel 时间: 2010-4-9 15:46

不知道分析的是什么物质。是反相色谱么？出峰时间好晚啊。出峰这么晚都分不开。估计再调节流动相比例来分开的几率比较小。还是调节下PH。或者把出峰时间调早些。加点离子对试剂看看吧

作者: santa 时间: 2010-4-9 15:46

应该把你用的什么柱子和流动相比例说明清楚吧！

作者: iwangfang 时间: 2010-4-9 16:29

色谱条件：大连依利特ODS C18柱 250mm*4.6mm 紫外可见检测器
缓冲盐采用的就是庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾以及三乙胺，调PH=4.5，然后与乙腈以不同比例配制流动相，改变其配比，两种物质并不能得到有效分离，当以8;2配制流动相时，两种物质都在10min以内出峰，但情况基本与6;4的一样，两种物质无法分离。
改变流速看分离效果的依据是什么?

作者: 小蹄子 时间: 2010-4-9 18:48 标题: 回复 #10 iwangfang 的帖子

你说的是两种未知的中性物质？既然是未知，又怎么知道是中性？测pH了？既然是中性，又何需加庚烷磺酸钠，庚烷磺酸钠是离子对色谱法中用来测碱性物质的！

粗摸条件建议楼主用水和乙腈（或甲醇）跑个梯度试试，你这个乙腈分得不好或许甲醇就会分得很好。加缓冲盐的目的多是为了减少拖尾和提高保留，而且能不加最好不加。

作者: dragon5 时间: 2010-4-9 20:23

QUOTE:

原帖由 iwangfang 于 2010-4-9 16:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
色谱条件：大连依利特ODS C18柱 250mm*4.6mm 紫外可见检测器
缓冲盐采用的就是庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾以及三乙胺，调PH=4.5，然后与乙腈以不同比例配制流动相，改变其配比，两种物质并不能得到有效分离，当以8;2配制流动 ...

要摸方法的话，楼主如果允许，可以把两物质的结构式发出来，让大家研究研究，毕竟液相条件的选择还是根据物质的官能团来选的啊。
要不然不好做的，影响因素太多了

作者: renmr03 时间: 2010-4-9 20:23

可否把图谱传上来看看?

作者: maomi530 时间: 2010-4-9 20:25

同一物质出两个峰，奇怪。。。

出峰时间这么长

你的流动相中离子对试剂、缓冲盐都用上了

作者: sseia42 时间: 2010-4-10 00:12

QUOTE:

保留时间这么长，不加离子对试剂，加磷酸二氢钾以及三乙胺的量结果如何。

作者: piaoliang110mei 时间: 2010-4-10 00:13

保留时间在51.60min与54.29min的为同一物质？？同一物质分为俩峰？不明白如果是异构体的话还说得过去。可以先换柱子试试看，还不行的话就要调流动相了。最好那结构式来大家分析一下

作者: 考研吧 时间: 2010-4-10 00:16

不可能是同一种物质!可能是同分异构体！请问楼主是用什么柱子，什么液相条件？若是反相，而且梯度很缓的话，可能再怎么优化都分不开了！换用亲水柱可能会分开！

作者: thereyoube 时间: 2010-4-10 22:08

我有三个问题想先问一下。
1.你很肯定地说51.60min与54.29min的为同一物质，49.91min的为另一物质。依据图谱我觉得51.60min与49.91min的为同一物质的可能性更大，其中51.60min的峰为49.91min的峰的肩峰。我不知道你定过位没?不过我觉得即使定过，也不会出现51.60min 与54.29min一起的峰。

2.你说“当以 8;2配制流动相时，两种物质都在10min以内出峰，但情况基本与6;4的一样”.我想确定一件事，是磷酸盐：乙腈（8：2）时两种物质都在10min 以内出峰吧？那么磷酸盐：乙腈（6：4）时的结果就是我们现在看到的图谱吧？有机相比例提高不少，却都要在50min后出峰。不知是LZ搞错了还是我搞错了。

3.根据你的流动相以及我的经历，这两种成分应该是诸如盐酸伪麻黄碱，马来酸氯苯那敏，氢溴酸右美沙芬之类的感冒药成分，不知我的直觉对不对，请LZ最后公布一下答案。最后发表一下我个人的见解：可能是浓度过高导致柱子过载，出现肩峰现象。也就是说你的柱子不怎么好了，所以最直接的办法是换一根好的柱子。

作者: 大葱一根 时间: 2010-4-15 22:01

QUOTE:

原帖由 haohaorenjia 于 2010-4-9 11:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
为何同一物质会出现两个色谱峰，肯定不是同一物质。

光看到了色谱图，没有色谱条件，神仙也不知道怎么帮你提高分离度。建议楼主说清楚点，大家好帮你。 ...

是啊，这个真奇怪

作者: 大葱一根 时间: 2010-4-15 22:09 标题: 回复 #18 thereyoube 的帖子

看它的强度轴，响应值好像也不是很高。

不明白为什么要让它跑这么长时间，费时费力费物。要探索一个好方法，应该先把时间缩短点吧，不然试一针就一个小时，一天总共才能试几针啊

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)