标题:
关于毛细管电泳的问题
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作者:
377638xie
时间:
2010-4-25 15:46
标题:
关于毛细管电泳的问题
本人做毛细管电泳拆分N-乙酰-DL-蛋氨酸的两个对映体,对氨基酸进行了衍生化,使其具有较大的紫外吸收,做了关于缓冲液Ph值的变化、α,β-环糊精浓度的变化、试了两个背景电解液,但就是不见两个对映体分开。请问大家有什么建议,谢谢。。
作者:
aa_tang
时间:
2010-4-25 20:32
标题:
回复 #1 377638xie 的帖子
手性毛细管电泳拆分N-乙酰基保护的氨基酸,楼主都尝试了哪些运行缓冲液及其pH值呢?手性选择剂仅仅试验了α,β-环糊精吗?
系统地考虑,个人认为有如下一些实验参数需要考察优化:
1. 手性选择剂的种类及用量对分离的影响;
2. 缓冲液的pH值和浓度对分离的影响;
3. 运行电压;
chiral CE,手性选择剂有近乎决定性的影响,既然楼主试用了α-,β-环糊精,都未曾见明显拆分效果,个人建议,可以考虑试试 γ-环糊精,看是否有效?基于结构修饰过的β-环糊精,在手性分离中有广泛的应用,因此,个人强烈建议重点考察:甲基-β-环糊精(Me-β-CD)、羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)等手性添加剂对分离的影响。
另一方面,如常规的毛细管电泳法,考察磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐等缓冲体系的分离效果。同时,也可以考虑在体系中添加十二烷基磺酸钠,胶束电动毛细管电泳法。。。
实验之前,以N-acetyl-amino acids、enantioselective、cyclodextrin、chiral CE、N-Acetyl-DL-Methionine等为关键词,多找相关文献,读读,会很有帮助的。
整个实验下来,一篇SCI的文章就出来了。。。呵呵
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本帖最后由 aa_tang 于 2010-4-25 20:33 编辑
]
作者:
LUMGR
时间:
2010-4-25 23:25
楼主,这个应该还是从分离方面找解决办法的,做拆分是有一定困难。
可以尝试不同缓冲液及添加剂啊,像金属铜离子,氨基酸等。不要仅局限于环糊精。
作者:
wyznanhang
时间:
2010-4-26 17:05
楼主,找文献看看吧!楼上群主大侠回答的很发好啊!!
作者:
greenhot593
时间:
2010-4-27 01:09
标题:
回复 #2 aa_tang 的帖子
这位大哥是专家嘛,哈哈
我也是做电泳手性拆分的,药大药分的,有时间我们交流交流,哈哈。
作者:
greenhot593
时间:
2010-4-27 01:18
用β-CD类的拆氨基酸衍生物应该问题不大,buffer用磷酸盐体系就可以了,最关键是2个因素:选择剂的浓度和pH。
推荐用HP-β-CD,浓度尽量配得高些(至少40mM以上),可以考虑加甲醇增大HP-β-CD的溶解性和改善分离效果。
作者:
r_wang
时间:
2010-4-27 10:25
关毛细管电泳拆分对映体特别是通过添加环糊精的方法,我们一定要认识到手性分离与环糊精的种类和浓度、缓冲液的浓度和pH及分离温度、电压有关。考察队分离的影响一定要系统地考察,不能仅考察同一参数的一两个不同来评价某个参数的拆分能力。
故建议:(1)系统考察各参数对分离的影响;(2)排除衍生试剂对手性中心是否有影响。
作者:
jt_fu
时间:
2010-4-27 10:30
考虑到环糊精的溶解性、分离机理等因素,建议使用改性的环糊精为拆分试剂,比如羟丙基-b-环糊精(HP-b-CD)、二甲基-b-环糊精(DM-b-CD)等。
作者:
dairongji
时间:
2010-4-27 10:35
考虑以下几点:
(1) 分离电压
(2) 环糊精浓度
(3) 被分离物质的浓度
(4) 缓冲溶液pH值、浓度
作者:
zhurh
时间:
2010-4-27 10:39
如果不经衍生,β-环糊精可以很容易将对映体分开,常用的硼砂缓冲即可,如果经过衍生,应考虑使用的什么衍生试剂,如果衍生试剂分子较大,可能β-环糊精不合适,而且这种情况下用金属离子可能也不太有效;如果衍生后极性减小,可考虑使用SDS和β-CD。
作者:
q_r_epcnge
时间:
2010-4-27 11:32
QUOTE:
原帖由
377638xie
于 2010-4-25 15:46 发表
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本人做毛细管电泳拆分N-乙酰-DL-蛋氨酸的两个对映体,对氨基酸进行了衍生化,使其具有较大的紫外吸收,做了关于缓冲液Ph值的变化、α,β-环糊精浓度的变化、试了两个背景电解液,但就是不见两个对映体分开。请问大家有什么建 ...
氨基酸用紫外检测器不能检测到么?为什么还要衍生呢?
作者:
命运--ses
时间:
2010-4-27 11:33
用vancomycin拆分一下试试,想用环糊精,你可以试试r-CD,或者别的修饰后的环糊精
作者:
lei
时间:
2010-4-27 13:57
标题:
回复 #10 zhurh 的帖子
氨基酸衍生物用配体交换的方法进行手性拆分效果更好。
作者:
hwliu
时间:
2010-4-27 17:11
可尝试:
1.改性的环糊精或冠醚等其它手性选择剂,可适当根据衍生后的氨基酸粒径及带电情况进行选择;
2.BGE中引入表面活性剂或有机溶剂,构建多维分离体系;
3.优化衍生化方法,若衍生基团较大而氨基酸自身较小,则可能增加手性分离难度。
作者:
td_wang
时间:
2010-4-27 17:14
2楼说的非常详细。同时,可以采用其他非环糊精手性体系,如使用糖肽类万古霉素,使用氨基酸与金属离子的络合体系等等。
也可以使用带电荷的环糊精,并注意环糊精的浓度对于分离度变化非常重要,建议对同种环糊精高低两浓度考察。
作者:
sh_wu
时间:
2010-4-27 17:25
建议环糊精的种类多试几种,尤其是衍生的倍他环糊精。也许是你的环糊精的空腔太小了不能使两对映体有区别的嵌入,另外没有衍生的倍他环糊精的溶解度很小。
作者:
Ji-Jun.Yao
时间:
2010-4-27 17:30
QUOTE:
原帖由
377638xie
于 2010-4-25 15:46 发表
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本人做毛细管电泳拆分N-乙酰-DL-蛋氨酸的两个对映体,对氨基酸进行了衍生化,使其具有较大的紫外吸收,做了关于缓冲液Ph值的变化、α,β-环糊精浓度的变化、试了两个背景电解液,但就是不见两个对映体分开。请问大家有什么建 ...
当然可以。实际上用间接法,AAS还可以测量氯离子,硫酸根,磷酸根,以及一些有机物。
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