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标题: 10版药典中甘油的“二甘醇、乙二醇与其他杂质”检查？ [打印本页]

作者: ongon 时间: 2010-4-27 08:57 标题: 10版药典中甘油的“二甘醇、乙二醇与其他杂质”检查？

如题，我们做用的是ZB624柱（固定液：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷），柱长30m，内径530um，膜厚0.3um。载气流速4.5ml/min。其他条件同10版药典。结果发现，对照品溶液图谱情况良好，各峰分离度很好，峰面积之比（该法为内标法测定）的RSD<5%,出峰顺利乙二醇-正己醇-二甘醇。
但系统适应性图谱就不行了，溶剂峰（甲醇）拖尾严重，干扰乙二醇，更纳闷的是二甘醇峰会消失,在二甘醇应该出现的保留时间前后也无峰出现，加大二甘醇的浓度也没有峰出现，真是怪了。做了好多次了，都是如此。
可以确定的是，做供试分析会严重污染柱子，对照品溶液（无甘油）进样分析正常（多次进样也正常），供试品溶液和系统适应性样品溶液（均含甘油）分析溶剂峰就会拖尾，影响乙二醇峰，然后再进对照品溶液也会如此。但柱子老化后，对照品溶液进样分析就会正常了。
不知那位战友做过这个品种，有没有遇到这问题？或者有经验的战友，这种情况可能是那里出现了问题 .

作者: unknow 时间: 2010-4-27 08:57 标题: 回复 #1 ongon 的帖子

用SE-54柱时遇到过如果样品的含水量超过一定值会使甲醇峰变宽、拖尾，楼主的意思是不是有甘油时溶剂甲醇就会严重拖尾，无甘油溶剂甲醇峰就无影响？这样的话解决溶剂峰的拖尾而影响乙二醇问题不如换一种溶剂试试，比如用乙腈、丙酮等。

二甘醇可能会和甘油一起共费出来（甘油的保留时间应该在二甘醇后面吧），可以加大二甘醇的量看哪个峰变大就到哪了。再改变色谱条件使这两种物质予以分离。不过即使分开甘油对二甘醇的影响仍属于基体影响，恐怕需要做加标回收率了。如果能通过换柱减弱或消除这种影响就最好了，建议试试极性更大的柱子如OV-225

作者: woaifou 时间: 2010-4-27 09:49

如果溶剂峰拖尾严重的话，开打吹扫气的流量试试。朋友有空常来论坛与大家交流。。

作者: bhnchnuo 时间: 2010-4-27 09:49

没遇到到过这样的问题，建议在样品前处理上多做工作

作者: 财富思考 时间: 2010-4-27 14:15

用安捷伦的柱子吧，DB-624的，柱子的问题

作者: ongon 时间: 2010-4-27 16:32

从今天结果看，有极大可能是前面战友所说的二甘醇和甘油共沸出来了。二甘醇浓度加大到药典浓度的25倍峰很明显，降到12.5倍就几乎看不出峰了。换分析条件恐怕比较难办，因为这是药典规定的分析条件，而我们是制剂厂家要控制进货质量，没法擅自改动分析条件。改了分析条件，估计被GMP核查专家发现了不好解释

。看来按前面战友所说的换极性大的柱子试试了。今天做的结果见附件，有兴趣的战友可以看看

。
谢谢前面战友的解答

才发现不能传word文件。

作者: ongon 时间: 2010-4-27 16:46

说明：对42010-4-27 12 25 191：对照品溶液图谱；系统32010-4-27 12 49 532为系统适应性溶液3图谱；系统22010-4-27 13 15 353为系统适应性溶液2图谱；系统12010-4-27 14 41 164为系统适应性溶液1图谱；对42010-4-27 14 38 201：对照品溶液图谱。（按进样先后顺序排列）
四种溶液乙二醇和正己醇浓度相同，系统适应性溶液1和对照品溶液二甘醇浓度相同（按10版药典配制），系统适应性溶液2和系统适应性溶液3中二甘醇浓度分别为对照品溶液中二甘醇浓度的12.5和25倍。
柱温：程序升温；自动进样。

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作者: 绿茵ssein 时间: 2010-4-27 17:04

我觉得溶剂峰拖尾跟进样量有关系，减少进样量试试，如果不行，再检查一下隔垫是否该换了，衬管是否干净？

作者: wangwei8857 时间: 2010-4-27 17:04

楼主，问题可能出在甘油上面。

作者: OSRCC_REE 时间: 2010-4-27 17:16

分流开大一点，或者采用不分流/分流进样看怎么样？

作者: thereyoube 时间: 2010-4-27 20:46

明白了，你的样品含有甘油，其沸点很高，因此在你毛细管柱的前面形成一层新的液膜，改变了你色谱柱的固定相，因此导致出现如此结果。
请注意，你的柱子是0.53mm的，膜厚却只有0.3um，是一个典型的薄膜柱子。你用宽口径毛细管的目的就是为了大进样量吧？可是却选择一个薄膜的，薄膜却要求进样量小才会有良好的分离效果，我有点不理解你的选择方式。好了，不说这个，你样品中的甘油在这一薄层上形成了新的液膜，而二甘醇在甘油中具有非常好的溶解度，因此保留时间明显增加，跑到了你第二章和第三章图的那三个蓝色矩形那里了。成为甘油峰前面的平台峰了。

你标准品后面可以看清甘油峰，其他样品这个峰都看不到顶。看第二章图是最明显的，除了对照品甘油峰很低明显可见，二甘醇在较前位置外，其他4个样品二甘醇都明显拖后，且甘油峰大到看不到峰顶，也就是说达到溶剂含量水平。
由于你是程序升温，实际上开始分析阶段，甘油在柱头形成新液膜后，由于甘油分子中羟基比例很大，因此分子中羟基比例大的都会产生强吸附，所以甲醇乙二醇和二甘醇都产生了强吸附，发生保留时间增加和拖尾的现象。
首先甲醇的分子量小且含量高，因此受到影响主要表现为拖尾严重，影响了后面乙二醇的分析。
其次乙二醇发生拖尾和保留时间延长，但由于含量低，所以拖尾表现不明显，并由于已经出现在甲醇拖尾上，难于发现。保留时间延长由于固有保留时间短而不明显，且因为位于拖尾而难于发现。看你仔细看，对照品的乙二醇峰起点终点位置实际是错的，实际峰宽较样品峰宽要小的多，这是发生拖尾的典型特点。

第三正己醇由于羟基少，因此基本不受影响。注意，甘油也是一个强极性固定液，因此正己醇所受极性取向力基本相当，所以出峰情况保持基本良好，仅仅因液膜加厚而产生少量拖尾。这个也可以从峰宽上看到。
第四是二甘醇。由于和甘油分子结构非常接近，沸点高保留时间长，因此受到明显影响，分析时间有显著增加，且严重拖尾。实际上二甘醇和甘油都是在柱头发生保留，在程序升温到一定程度后才被迫离开的。低温下它们基本不往前走。而且由于甘油的强极性特点，甘油本身就拖尾严重。其实你的二甘醇含量增加表现的是很明显的，就是甘油峰前面的平台峰高度啊。可是你没有注意罢了。你的对照品中的甘油峰应该是注射器残留吧？甘油粘度大，洗针比较难的。
。
分析了半天，不知道你看明白了没有。解决办法。。。。。。
1、提高柱箱初始温度吧，我觉得分离度还是可以做到的，这3个峰离得还是挺远的。
2、加大分流比，看你的基线平直度还可以，分流比再大一点，甘油液膜厚度就小了，这样影响就小一点。
3、增加末段程序升温过程，高速升温到合适温度，驱赶柱内残留甘油和其他杂质。注意温度不要过高损害柱子寿命。
4、如果可能，前面增加非极性反吹保护装置，避免甘油进入此柱子。

对了，补充一下。你这个例子我收藏了，是一个色谱理论在实践中的应用的很好的典型案例。所以我希望如果你看到了我的解答，并且据此作出了调整，那么请帮忙把调整结果在这里说明一下，让我知道我的理论分析是否正确。无论调整后效果是否良好，都最好能发张图看看。这里先谢谢了！

作者: ongon 时间: 2010-4-30 10:59

首先感谢大家的热心帮助！
估计部分战友手头没有10版药典，我先说下10版药典的检查方法：
对照品溶液：每1ml含乙二醇、正己醇（内标）、二甘醇各0.1mg的甲醇溶液；系统适应性溶液：每1ml含有甘油100mg，二甘醇、乙二醇、正己醇各0.1mg的甲醇溶液。供试品溶液：每1ml含甘油400mg，正己醇0.1ng的甲醇溶液。气相条件：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱，程序升温，起始100℃，维持4min，以50℃/min升至120℃，维持10min，以50℃/min升至220℃，维持6min；进样口温度200℃；检测器温度250℃。
我采用的方法是参照10版药典征求意见稿中的具体参数进行试验：毛细管长30m，内径0.53mm，膜厚0.3um，流速4.5ml/min，分流比10。
我使用的是瓦里安GC450型气相色谱仪，自动进样，毛细管柱为ZB624，长30m，内径0.53mm，膜厚0.3um。
试验过分流比30，定量限还可以，再大，对照品溶液图谱中二甘醇峰就在定量限下了。但以该分流比分析系统适应性溶液，问题照旧。
试验过程序升温起始120℃，维持14min，以50℃/min升至240℃，维持6min；问题照旧。
试验过进样口温度250℃；检测器温度280℃，问题依旧，而且从对照品溶液图谱中看出二甘醇在进样口好像分解了。
“thereyoube”战友所说的非极性反吹保护装置，小弟接触气相还不多，不知是什么东东？若这东西较贵的话，作为制剂厂家单单为了检查其中一种辅料，领导估计不会同意配置。
目前看来只有换另一种型号的柱子试试了，比如前面一位战友提到的安捷伦的DB624，不过这柱子手头没有，还要购买，还要算算预算超标了没有。
打算五一后试试固定液为改性聚乙二醇的毛细管柱，有进一步结果会来和大家回报一下

作者: 感悟人生 时间: 2010-4-30 11:00

呵呵，朋友，论坛上就2010版药典了。。

作者: ztj970831 时间: 2010-5-1 21:55

QUOTE:

原帖由 ongon 于 2010-4-27 08:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
如题，我们做用的是ZB624柱（固定液：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷），柱长30m，内径530um，膜厚0.3um。载气流速4.5ml/min。其他条件同10版药典。结果发现，对照品溶液图谱情况良好，各峰分离度很好，峰面积之比（该法为内标法测定）的RSD ...

做几个样品后将靠近进样器那端截掉一段试试看，

尤其是11楼专家回答的太详细了。。

作者: header 时间: 2010-5-1 21:55

每次试验后不着急降温，在高温区保持一段时间。

作者: iwfi325iwc 时间: 2010-5-1 21:55

楼上的高温区保留一段时间的目的是为了将溶剂消耗完吗？

作者: ongon 时间: 2010-5-14 10:52

高温区保留一段时间，我认为是为了将强保留物质（如甘油）洗出。

汇报一下结果。
最后用了聚乙二醇柱子，DB-WAX（30m，内径0.25um，膜厚0.25um）。程序升温，起始70℃，维持5min，以50℃/min升至170℃，维持9min，以50℃/min升至220℃，维持6min。

能够将二甘醇和甘油分离开。但还是明显可以看出，甘油在柱上有保留（溶剂甲醇峰拖尾没有改善，但基本上可以不影响乙二醇峰）。最大的问题是，随着供试品进样次数增加，乙二醇、正己醇、二甘醇峰面积逐渐减小。进样5次以后，这三个峰基本上都消失了，柱子要进行老化。
目前就用这方法凑合着检查了

作者: xusk 时间: 2010-11-13 15:21

怎么看不到图？

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