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标题: 【讨论帖】关于SDS电泳脱色的一种快速有效方法！ [打印本页]

作者: ukonptp 时间: 2013-10-11 11:20 标题: 【讨论帖】关于SDS电泳脱色的一种快速有效方法！

PAGE胶染色完毕后，如果用一般的甲醇－乙酸脱色液进行脱色，一般至少需要2－3h，但是我们实验室一般都利用蒸馏水煮的方法：
1.先将500ml蒸馏水放在一个干净的烧杯中，在电炉上煮沸。
2.将染色好的胶用DD水冲净后放入煮沸的蒸馏水中，煮3～5min。
3.将DD水倒掉，看胶是否已经脱净，如果还不好，可以用少量水再煮一次。
一般整个脱色过程最多15min即可搞定！
各位可以试试，可以避免每次脱色时搞得到处都是醋酸味！

作者: 00无名指00 时间: 2013-10-11 11:21

相关疾病：
普通感冒
我是用乙醇-乙酸配成的脱色液,胶放入后微波加热10秒钟至微热,上摇床,10分钟后,倒掉,换新的脱色液重复一次,不超过半个小时也好了.关键是不用甲醇了,避免毒性.醋酸倒没什么,还防感冒呢

作者: mimili_901 时间: 2013-10-11 11:21

那你的配方是什么？

作者: yes4 时间: 2013-10-11 11:21

乙酸：乙醇：水=1：2：7

作者: wood533 时间: 2013-10-11 11:22

用高温煮对你蛋白不会有影响吗？

作者: avi317 时间: 2013-10-11 11:22

我们是直接用脱色液加热到60度左右,摇10min中,再换过新的脱色液同意超作.效果不错呀.

作者: tie8 时间: 2013-10-11 11:22

关于“用高温煮对你蛋白不会有影响吗？ ”

蛋白上样之前已经煮过了，所谓死猪不怕开水烫。
而且SDSPAGE就是变性的条件。

作者: 7437654 时间: 2013-10-11 11:23

QUOTE:

原帖由 ukonptp 于 2013-10-11 11:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

PAGE胶染色完毕后，如果用一般的甲醇－乙酸脱色液进行脱色，一般至少需要2－3h，但是我们实验室一般都利用蒸馏水煮的方法：
1.先将500ml蒸馏水放在一个干净的烧杯中，在电炉上煮沸。
2.将染色好的胶用DD水冲净后放入煮沸的蒸馏水 ...

我用过，好象效果不好呀！

作者: 49888 时间: 2013-10-11 11:23

深圳国家生化中心有一种方法，不用醋酸和醇染色脱色，用的是什么我没试过，听说还不错，一点味道都没有，速度也快，感兴趣的不妨去他们网站去看看。我是用醋酸和乙醇脱色，就是电炉上煮，染色和脱色30分钟就可见结果

作者: nn255 时间: 2013-10-11 11:23

还有人直接放在微波炉里呢

作者: vivian4123 时间: 2013-10-11 11:24

我今天试用蒸馏水炮胶，并放在微波炉里加热，效果很好，而且速度快。

前几天我还看到一个有关快速染色的帖子。方法是胶放在染色液里，并在微波炉煮沸，再摇三分钟即可看结果。效果似乎不是很理想，脱色后看到胶染色不均匀。不知道是不是因为染色业放少了，给蒸发了？

另外我想问，用这种快速染色的方法。加热时甲醇，乙酸都已经蒸发了不少，这种染色业是否还可以重复利用。

作者: yonger 时间: 2013-10-11 11:24

加热脱色是比较快。
另外，深圳国家生化中心的网站我去看了，没有发现关于此类帖子呀？

作者: summerxx 时间: 2013-10-11 11:25

前几天我还看到一个有关快速染色的帖子。方法是胶放在染色液里，并在微波炉煮沸，再摇三分钟即可看结果。

是不是热染用的R350啊？

各位酶切的时候用什么脱色啊？本人都是用100mM NH4HCO3脱色，有时候也会放在37度水浴或者超声什么的，但是还是会有些顽固分子脱不掉色，郁闷。。。

作者: xingyi08 时间: 2013-10-11 11:25

我用的是R250,这个没什么太大差别，只是染色物质不同而已。

你说的酶切染色是什么意思？我用的这个脱色方法脱色非常完全。

作者: redbutterfly 时间: 2013-10-11 11:25

我们加入甲醇－乙酸脱色液后，将其直接放到微波炉里加热一分钟，然后放几张干净的tissue进去，能吸去很都染料，加快脱色，效果不错。

作者: flower@@ 时间: 2013-10-11 11:26

QUOTE:

原帖由 redbutterfly 于 2013-10-11 11:25 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我们加入甲醇－乙酸脱色液后，将其直接放到微波炉里加热一分钟，然后放几张干净的tissue进去，能吸去很都染料，加快脱色，效果不错。

tissue的毛毛会不会粘在胶上影响做质谱啊？

作者: tangxin_80 时间: 2013-10-11 11:26

把它叠成条状，沾在脱色皿边上就OK啦!(不要和胶混在一起）

作者: 66+77 时间: 2013-10-11 11:27

就算和胶混在一起也没关系的，我做过，用的经典的老方法，脱色的时候，放入几张纸，脱色加快了。
最近从同学那学到一种新的，至少对我而言是的，脱色液用的是0.5％mol/l的氯化钠，不但没有了刺鼻的怪味，脱色效果也不错。

作者: XYZQ 时间: 2013-10-11 11:27

用蒸馏水洗胶，并放在微波炉里加热，我们一直都在用，
效果很好。
只是要掌握好时间，时间太长而蛋白的含量又比较低的话，容易脱过了！

作者: xiaoxiaoniao 时间: 2013-10-11 11:27

"脱色液用的是0.5％mol/l的氯化钠"

What does that mean? How to make it? Thanks!

作者: bgf5 时间: 2013-10-11 11:28

对于蛋白质SDS电泳脱色，蛋白质性质有关，对于R-250着色强的蛋白质，采用经典方法、或加热方法都可以，如果着色差，都不好。

作者: taoshengyijiu 时间: 2013-10-11 11:28

脱色液用NaCL可以,效果不是很好,感觉胶胀的厉害!

作者: cocacola 时间: 2013-10-11 11:28

我今天试试用水的方法，用经典的方法我得脱色过夜才行。

作者: eve_49 时间: 2013-10-11 11:29

试了，效果不错，大约十分钟左右脱好的。

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