原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不像是有核酸干扰，感觉是你的胶没有凝好，或者你上样的时候是一隔一道上样，而且中间为空白道，什么都没上~~
上面的浓缩胶应该是破了吧，上样口处应该是沉淀，可能是你高温(煮沸)变性，而且变性上样缓冲液里以2-ME为主，高温的过程 ...

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:07 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不像是有核酸干扰，感觉是你的胶没有凝好，或者你上样的时候是一隔一道上样，而且中间为空白道，什么都没上~~
上面的浓缩胶应该是破了吧，上样口处应该是沉淀，可能是你高温(煮沸)变性，而且变性上样缓冲液里以2-ME为主，高温的过程 ...

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


谢谢啊 ，我确实是隔一个上一个样，不过我其实在煮沸前是有离心的，出现这个上样口沉淀，正常吗？？有没有可以解决的方法啊，因为我这个蛋白样，是要用来做双向的呢，担心沉淀影响聚焦啊 ，其实我以前的电泳图，也出现过，越往下越窄，不知道 ...

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:08 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


有的类似这样，在底部出现这个弧状，有的则是变窄，不知道可以解释这个现象吗？？

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


这个应该没有太大影响，至多就是样品没有完全变性，有少量损失而已，如果你感觉对你的结果有影响的话，那就在变性结束再加适量的DTT或者2-ME，如果你做双向的话，推荐你用DTT，就是变性的上样缓冲液里就用含有DTT的，好像2-ME更容 ...

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你用的六一的电泳仪吗？

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


不是6.1的啊 ，我有好多图，都出现那样的弧形状的，不知道啥原因，我想是不是什么东西干扰蛋白样品了？？谢谢啊

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


下面出现拱起来的现象不是污染，如果核酸污染（一般是DNA的污染，因为RNA很容易降解掉）那条带会有点呈现V字形的趋势；
而你的是整块胶中间往上拱，以前用六一的总会这样；既然这样那你就检查一下你的电泳液吧，看看离子浓度是否合 ...

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


恩，非常感谢啊，你说的V字形，是不是说，就是底部有点尖的样子呢》》？就是整个泳道，下面比较尖，是这样的吗？

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


不是，如果样品里含有DNA的话，条带会出现V字形的趋势，DNA含量少的话会中间稍微向下尖，含量越多往下尖的越严重~~
注意我说的是条带，不是泳道，条带跟泳道不是一个概念的…… ...

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


恩，明白了，就是说，条带不是平的，而是呈现“笑脸”状，非常感谢啊，你看我中间那个样品，出现拖尾，而且有点模糊，大侠觉得这是什么原因造成的 啊？？ ...

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:22 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


里面有细颗粒状沉淀，所以出现拖尾；
条带呈现波浪状，可能你的样品里盐离子浓度过高；还有一点就是电泳缓冲液可能离子浓度也有点高，可以检查一下配方…… ...

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你好，这个颗粒状沉淀，是不是蛋白沉底啊？？盐离子浓度高，我这个牛肉蛋白，也需要除盐吗？？

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
重新跑了次，顶端那絮状的东西，是不是也是蛋白沉淀啊 ，这个有没有什么方法来解决啊？？

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:33 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


应该是你的蛋白变性有问题，尤其是左起第4道~~

原帖由 11_hjx 于 2013-10-17 15:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


你好，大侠在不？我又提蛋白跑了次，请帮忙看看，有哪些不足啊，这个是要上双向的！！你说的那个“鬼影”貌似还在啊，你们跑得时候都能很好的出去吗？？请指教啊 ！！ ...

原帖由 greenbee 于 2013-10-17 15:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


有时候也会偶尔出现，很久没做了，没太在意了~~
其实从图上看，这张电泳图除了上样孔处看似有沉积之外，其余还都挺好的了，不知道变型用的是什么还原剂，推荐你用DTT，而且双向电泳本身也推荐用DTT做还原剂~~ ...