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标题: 【讨论帖】蛋白版畅谈自己课题，欢迎参与 [打印本页]

作者: wmp1234 时间: 2013-10-22 15:42 标题: 【讨论帖】蛋白版畅谈自己课题，欢迎参与

我先说说我的：

肺炎衣原体CPAF原核表达、免疫活性研究及其单克隆抗体的制备。

1、CPAF原核表达

通过基因克隆的方法，将重组载体PGEX6P/2转化大肠杆菌BL21中，在合适的条件下诱导其大量表达；

2、CPAF重组蛋白纯化

蛋白以包含体形式存在，使用亲和层析法纯化；

3、免疫活性的研究

重组蛋白免疫BALB/C小鼠，4w后采血ELISA测血清效价；GST单抗western－blot鉴定蛋白特异性；

4、重组蛋白免疫BALB/C小鼠，常规免疫后进行融合试验，融合成功后经三次ELISA确定阳性克隆；扩大培养后免疫BALB/C小鼠大量生产；纯化免疫后得到的腹水；

5、与重组蛋白、肺炎衣原体标准株western－blot；与沙眼衣原体、鹦鹉热以原体进行免疫荧光确定单抗与其他以原体无交叉反应；检测临床诊断为肺炎衣原体阳性感染病人的外周血单核淋巴细胞（MIF)并与美国进口肺炎衣原体单克隆抗体检测结果比较。

作者: wmp1234 时间: 2013-10-22 15:42

我先说说我的：

肺炎衣原体CPAF原核表达、免疫活性研究及其单克隆抗体的制备。

1、CPAF原核表达

通过基因克隆的方法，将重组载体PGEX6P/2转化大肠杆菌BL21中，在合适的条件下诱导其大量表达；

2、CPAF重组蛋白纯化

蛋白以包含体形式存在，使用亲和层析法纯化；

3、免疫活性的研究

重组蛋白免疫BALB/C小鼠，4w后采血ELISA测血清效价；GST单抗western－blot鉴定蛋白特异性；

4、重组蛋白免疫BALB/C小鼠，常规免疫后进行融合试验，融合成功后经三次ELISA确定阳性克隆；扩大培养后免疫BALB/C小鼠大量生产；纯化免疫后得到的腹水；

5、与重组蛋白、肺炎衣原体标准株western－blot；与沙眼衣原体、鹦鹉热以原体进行免疫荧光确定单抗与其他以原体无交叉反应；检测临床诊断为肺炎衣原体阳性感染病人的外周血单核淋巴细胞（MIF)并与美国进口肺炎衣原体单克隆抗体检测结果比较。

作者: qiangren789 时间: 2013-10-22 15:43

我也参与一个：
课题：Calvin循环多酶复合体的纯化与鉴定
1、通过一些生化方法（分子筛层析，离子交换层析)纯化这一复合体
2、通过各种电泳方法（PAGE、SDS-PAGE）鉴定这一复合体组分及其分子量
3、对其结构进行分析（目前还没有做到这里，还没有想到好的方法呢）

作者: junjie05 时间: 2013-10-22 15:44

积极参与：
我的课题是关于蛋白质芯片方面的，目前做自身免疫性抗体检测芯片的研制．
主要用于检测抗15~18种自身抗原抗体的检测，包括ANA谱，ccp,CENP-B,核小体等等．
有些抗原可自己制备，如dsDNA等，有些需要重组表达，如CENP-B等，有些需要直接购买。
目前的工作是在已有的基础上做的（师姐做过），但仍存在有很多问题需要解决。
希望有相似课题的战友相互帮助，共同进步！

作者: taoshengyijiu 时间: 2013-10-22 15:44

我也来一个：
主要从海洋药用贝类资源中纯化鉴定具有抗肿瘤作用的蛋白或多肽
1 ，蛋白的提取，分离,凝胶柱层析，超滤，FPLC等
2 ，活性检测；主要是细胞筛选了
3 ，蛋白鉴定，主要是MS ，以及N末端测序
4 ，普遍的检测手段如，BCA，SDS-PAGE
希望大家多多交流！

作者: 831226 时间: 2013-10-22 15:46

我也来一个
课题是与抗菌肽相关
1 预测已有抗菌肽的共有的特点，如二级结构，氨基酸组成
2 分析氨基酸组成与抗菌肽抗菌活性及溶血性之间的关系
3根据分析结果，合成纯度大于95的抗菌肽进行抗菌活性和溶血性的分析。

作者: 2541 时间: 2013-10-22 15:46

发现一段序列，在蛋白N端可以促进其在大肠杆菌中表达，构建没有这段序列的蛋白不能表达，或表达量很小，正在努力研究
1。截断该序列，构建到蛋白中，看看怎么样
2。或突变几个氨基酸，具体的还没有想好，请大家指点

作者: cj_mondy 时间: 2013-10-22 15:46

我的课题是关于病毒的受体鉴定方面的：
1. 酵母表达病毒的表面膜蛋白；
2. 以病毒易感的一种神经细胞膜蛋白建立噬菌体展示文库，利用表达的蛋白筛选病毒在这种神经细胞膜上的受体；
3. 通过RNAi和免疫组化鉴定受体的作用与机体内的分布。

斑竹：鼓励一下新战友，加分呀！呵呵！

作者: she 时间: 2013-10-22 15:47

相关疾病：
心力衰竭
冒个泡:我的课题是研究小鼠心肌肥厚和心衰过程中心肌细胞上一种钾离子通道的亚单位KV4.2的变化情况.大致步骤:
1动物病理模型的建立
2模型成功与否检测
3WESTERNBLOT检测蛋白水平的改变
4PCR检测mRNA水平的改变

作者: ROSE李 时间: 2013-10-22 15:47

相关疾病：
肿瘤
我的研究课题是maspin对HDAC的抑制作用，及对肿瘤的影响。
采用的技术手段有siRNA,chip,ip,gst-pull down,real time-rt-pcr,等

作者: yapuyapu 时间: 2013-10-22 15:48

相关疾病：
再灌注损伤
俺比较可怜，没有课题，支持版助，谈我熟悉的一个的领域
肝脏缺血再灌注损伤
1　缺血再灌注模型的建立和保护因素的使用
2　损伤指标的检测（功能：ALT　AST，结构：光镜，电镜）
3　氧化应激的检测（抗氧化酶活性，MDA活性）
4　炎性反应的检测（RT、ELISA测炎性因子，western/EMSA测上游转录因子）
5　中性粒浸润检测（免疫组化测ICAM等粘附分子，MPO活性/染色测中性粒浸润）
5　细胞凋亡的检测（western测促凋和抑凋分子，TUNEL/DNA酶切图谱测凋亡）
6　免疫荧光/细胞分离和共培养/基因敲除+骨髓移植/特异性细胞激活和抑制剂/最终确定效应细胞和效应分子。

作者: +小生怕怕+ 时间: 2013-10-22 15:48

我做的是一个抗菌肽（AMP)基因的原核串联表达（大肠杆菌）以及抗体的制备。
1、原核表达
前期工作中用pET32a表达我的AMP，由于融合的是TrxA蛋白，是增融的，所以目的蛋白的毒性完全表现出来，因此没能成功表达我的AMP。
所以改变策略，打算用pET31b来表达，同时准备将我的AMP串联起来表达

2、AMP重组蛋白纯化
蛋白以包含体形式存在，使用亲和层析法纯化；

3, 融合蛋白的酶切，纯化
用CNBr切割融合蛋白，得到我得目的蛋白单片断。然后用反相色普，分子筛的方法纯化目的蛋白

4、抗菌活性的研究
检测表达的AMP的抗菌活性

5、目的蛋白免疫小鼠，制备多抗（有条件可以制单抗）

作者: dongdongqiang 时间: 2013-10-22 15:49

凑个热闹，我是中途转过来做蛋白质组的，生化的东西不太懂，做得比较浅
1. 中药作用下动物组织蛋白质表达差异，
动物造模，给药，生化测定，2-D分析，蛋白鉴定，作用机制推断
2. 植物蛋白质组分析，主要是用蛋白组表达模型研究药用植物的亲缘性
植物蛋白的提取纯化、2-D分析，蛋白鉴定，聚类树，与传统形态学分类结果比较

作者: mamamiya 时间: 2013-10-22 15:49

相关疾病：
运动医学
呵呵，惭愧，我是做运动医学方面的，目前方向是骨骼肌再生的蛋白质组研究：
1.观察不同不同损伤方式、不同运动方式后快肌（胫骨前肌）与慢肌（比目鱼肌）蛋白质表达差异。
2.观察用不同损伤方式作用后，以及不同运动方式后肌肉提取物对培养的成纤维细胞的影响。
3.在以上得到初步确认后，观察一种从牡丹科植物当中提取到的活性成分对于与骨骼肌再生的作用，实验方法包括双向电泳、质谱分析、免疫组化、以及一些常规生化检测等。

作者: 8princess8 时间: 2013-10-22 15:50

和大家多交流一下,也希望能有更多方向相近的人来一起共同讨论,共同提高.
我的方向是海洋药物学.
所做内容为:
1.海洋抗菌肽在酵母和大肠杆菌中的表达,纯化.其中酵母是单纯表达,用PAGE检测,用离子交换柱纯化.而大肠杆菌是用的融合可溶性表达,过镍柱纯化,然后Xa因子蛋白酶切再纯化.
2. 海洋抗菌肽抗肿瘤活性的研究.主要是做细胞方面的抗肿瘤研究.
做的东西不多,实验也不是非常顺利,希望能和大家共同探讨.

作者: guagua 时间: 2013-10-22 15:51

我也参与一下，我是做凝乳酶的提取纯化，没有什么技术含量。主要应用蛋白质的一般分离技术，先是乙醇分级沉淀，之后利用层析法进行纯化，研究其凝乳的机理，另外一方面是通过微生物发酵产凝乳酶，也是进行分离纯化。呵呵，本人学识浅薄，就凝乳酶的提取纯化就让我很挠头，希望大家多多帮忙，先谢了！

作者: xyw5 时间: 2013-10-22 15:52

相关疾病：
甲状腺功能亢进症心房颤动
支持一下，和大家共同进步！谈谈以前和师兄一起参与的导师的课题。
甲状腺功能亢进并发心房颤动时心房和肺静脉缝隙连接的改变
1、腹腔注射左旋甲状腺素建立兔甲状腺功能亢进模型。
2、甲状腺功能亢进兔行快速心房起搏建立心房颤动模型。
3、Western blot观察心房和肺静脉缝隙连接蛋白CX43、CX40蛋白的变化。
4、RT-PCR观察心房和肺静脉缝隙连接蛋白CX43、CX40 mRNA的变化。
5、用免疫荧光抗体标记激光共聚焦显微镜检测心房和肺静脉Cx43和Cx40的分布。

作者: wu11998866 时间: 2013-10-22 15:53

我做一蛋白与DNA-pol相互作用的
1. 先Western 检测Hela 中DNA-pol 内源性含量
2. 带标签的该蛋白质粒转入Hela (无市售该蛋白抗体)
3. Western 证实外源转入基因表达情况
4. IP

作者: duoduo 时间: 2013-10-22 15:54

我做PP150的载体构建,表达,发酵,纯化,鉴定,及后续开发
主要所用的方法就是蛋白方面常用的方法,比如PCR, 酶切,连接,转化,发酵,纯化,weston-blot,ELISA等!

作者: qianqin1977 时间: 2013-10-22 15:54

我做不同活力的杂交水稻的差异蛋白质,样品多,工作量大,做二向估计是做不成的了,直接做了SDS-PAGE 后上质谱,现在正在预备实验中.

作者: 98776langtao 时间: 2013-10-22 15:55

我来说说吧，希望能得到dxy宝贵的第一分：
我是构建了一个炎症因子HMGB1的6种突变体蛋白，从中筛选出能与THP-1细胞膜上HMGB1蛋白受体结合但不产生炎症效应的突变体蛋白，从而竞争性抑制HMGB1的炎症作用。
1、从人扁桃体组织中提取总RNA，通过反转录PCR得到cDNA。
2、构建突变体：一步反向PCR引入突变，构建六种突变体，构建到质粒pUC18中。
3、酶切目的片段构建到原核表达质粒pQE80L中，表达出蛋白并用western blot鉴定。
4、蛋白纯化。
5、激光共聚焦显微镜筛选出只与受体结合不产生炎症效应的突变体蛋白。
6、细胞实验观察筛选出的蛋白抑制炎症的效应。
7、小鼠实验观察筛选出的蛋白抑制炎症的效应。

作者: tie8 时间: 2013-10-22 15:56

我的课题是：牛肠激酶在酵母菌中的分泌表达
主要涉及：1.重叠PCR合成扩增出酵母偏好性密码子编码的EK基因
2.构建PPic9k/ek质粒
3.电转化酵母菌株 Gs115
4.筛选出高拷贝的 Gs115/ek工程菌
5.构建含ek切点的表达水溶性融合蛋白的重组质粒
6.发酵纯化，检测ek酶活

作者: yes4 时间: 2013-10-22 15:56

我也参与一下：我做的是两栖类晶状体再生中的晶状体蛋白的表达，由于没有抗体，所以用常规的方法
首先提取再生组织眼睛的总蛋白，然后跑电泳，通过分子量来初步确定是否含有晶状体蛋白，以此来检测有没有再生
2：然后再看哪种晶状体蛋白先表达，由于这几种蛋白解离后亚基分子量很接近，所以用活性电泳（请教师兄师姐看此方法是否可行，我是个超级新手）
3：再做双向电泳，抠出蛋白点做分析，看看是那种蛋白的亚基，来以此推断有那种蛋白，（必要的话再做质谱)
我不知道需不需要做HPLC,请各位师哥师姐指教，多谢！！！

作者: 30moonriver 时间: 2013-10-22 15:58

我也来说说，我的课题是《IGF-1在甘蓝质体中表达的研究》
目的：让IGF-1在甘蓝质体中高效表达，达到形成口服疫苗或生产IGF-1的目的。
步骤：1.IGF-1甘蓝质体表达载体的构建；
　　　2.通过基因枪对甘蓝实施基因遗传转化；
　　　3.抗生素筛选阳性植株；
　　　4.转基因植株的分子验证。
　　　5.IGF-1的分离，蛋白活性测定；

作者: any333 时间: 2013-10-22 15:58

我也说说我的试验吧，我的实验是荒漠昆虫体内两种蛋白的表达分析。其一是抗冻蛋白，目前做了半定量分析，发现抗冻蛋白是季节性调节的，短期的冷冻处理，并不能提高抗冻蛋白的表达量。接着准备做更精确的实时定量PCR来进一步确定结果。另外一个蛋白是热休克蛋白70。主要是通过不同的温度处理昆虫，看其表达量的变化。同时，还在制备这两种蛋白的抗血清，希望在蛋白水平上可以检测这两个蛋白在不同时期的表达量的变化。
实验是自己想的，希望高手多多指点！

作者: xingyi08 时间: 2013-10-22 15:58

我的课题老板给的，听行家说既很花钱又很难作。主要是关于蛋白组方面。

目的：通过导入目的基因分析它对其他基因表达影响，从而找到一个新的药物治疗靶点，并作体外药物治疗应用。

步骤：
1.构建腺病毒穿梭质粒携带目的基因的载体表达系统。
2.提取转染了目的基因的细胞膜蛋白作2－DE和质谱分析，检测膜差异蛋白表达，.
3.确定膜差异蛋白作为靶向药物治疗点。
我刚觉得很兴奋，经过2个月找资料，问行家现在此不好睡不好。

作者: H2O 时间: 2013-10-22 15:59

支持楼主：
俺的课题也是老板给的：
乙酰胆碱受体单链抗体的真核表达及鉴定
步骤：
1，将师兄构建好的表达载体从原核中提取纯化，酶切后电转化真核酵母菌
2，挑选阳性转化子进行蛋白表达
3，SDS-PAGE ,WB检测蛋白
4，用大鼠肌肉冰冻切片做免疫荧光定性实验

大概就是这些，但是由于我们实验室真核转化及表达技术不成熟，所以第1，2步就遇到了很多困难，实验做的不是很顺利，正在查资料找方法，希望有做真核转化表达的战友给些建议：）

作者: 49888 时间: 2013-10-22 16:00

我的课题也是老板给的
NOS合酶在脊髓水平疼痛传递的作用。
1.注射药物，脊髓样品制备
2.冰冻切片，免疫组化定位，半定量。
3.WESTERN BLOT分析、定量。

目前就到这里，但是遇到了很多困难，正郁闷中。。。。

作者: windy+++ 时间: 2013-10-22 16:00

老板给我定的宏大的课题：分别用原核，酵母，和昆虫表达EBV相关抗原，然后，上小鼠；上完小鼠，上猴子；最后上人，疫苗研发成功。可我现在连魔板还没有，也不让养B95-8，怎么毕业啊

作者: 911 时间: 2013-10-22 16:01

我还没开始做，也说说我准备做的课题方向。
准备用蛋白质组学的方法，做有关肾移植前后的尿液中蛋白表达的差异和在移植排斥反应发生的过程尿液中蛋白质的变化差异，寻找排斥反应的标志物。
主要用到的方法有，二维电泳，HPLC，毛细管区段电泳，质普分析，蛋白质组信息学等方面。

作者: 8princess8 时间: 2013-10-22 16:01

也说一下我的课题吧:
筛选有效链球菌亚单位疫苗
试验程序:
1选择几种已报道过具有较好免疫效力的蛋白抗原,作为重组亚单位疫苗的候选成分
2两两重组表达这些蛋白
3小鼠免疫,测抗体效价
4选择抗体效价高维持时间长的重组蛋白进行动物保护试验
5与死苗以及单个蛋白的免疫效果进行比较
目前已重组表达了四组重组蛋白，将要免疫小鼠测抗体效价

作者: tianmei001 时间: 2013-10-22 16:03

我也来交流一下吧。
我的课题是分离纯化真菌细胞膜上结合的酯水解酶类，并且研究其性质。
这些只是现在暂时定的论文的一部分，等这部分完成了可能要做关于分子方面的试验，但是偶对分子生物学是一窍不通。

作者: vera+ 时间: 2013-10-22 16:03

我的课题是：抗狂犬病抗体在毕赤酵母中的表达
步骤：1.表达载体的构建；
　　　2.抗生素筛选阳性植株；
　　　3.表达，SDS-PAGE 、WB、ELISA检测蛋白及活性；
4.摸发酵最优条件上发酵罐；
5.纯化测活

作者: birdfish 时间: 2013-10-22 16:04

我课题是用蛋白质组学的方法研究一种具有特殊活性的酶，建立定性、定量的方法。通过细胞膜行、动物模型研究病理模型下其他蛋白质的变化

作者: moonlight45 时间: 2013-10-22 16:04

相关疾病：
类风湿关节炎
我的课题：主要是研究RA 的血管新生方面
1、首先造膜，类风湿性关节炎大鼠模型
2、体外培养293细胞，将内皮抑素（endostein)重组腺病毒载体转入扩增病毒上清，然后注入模型大鼠体内。
3、并采用中药罐胃干预与以上组进行比较，分别在4和8周取血，提取总蛋白，并将滑膜切片。
4、分别采用免疫印迹和免疫组化检测endostein、TNF、MMP-1、2、8、VEGF、IL-2等血管生长和炎症因子表达情况。
目前，已完成造膜、提取蛋白，正在进行WB，愿一切顺利！

作者: c86v 时间: 2013-10-22 16:04

相关疾病：
宫颈癌
我也说说我的课题吧，
研究的方向是“P53和HPV相关性宫颈癌”，具体内容是：
1.构建HPV和P53真核表达载体
2.两者转染细胞制造宫颈癌的模型并观察两者的相互作用
3.HPV作用P53后对细胞的功能的影响
这是我的课题大致的内容，实验过程中的细节真是一点一点摸索的，每一步都是问题，现在我做到转染并检测两种蛋白的相互作用，遇到了一些问题，很难解决，因为我用的是骨肉瘤细胞，用Lipofectamine 2000的转染效果十分不好，大量的细胞死亡，万不得已我现在运用磷酸钙共沉淀法，但还在摸索。各位，有没有建议欢迎给我提出，谢谢！

作者: Ao7 时间: 2013-10-22 16:05

我是预防兽医学的，课题是“禽流感流行毒株的抗原谱”，可是到现在我也没有弄明白。抗原谱是什么意思。
老师的意思是这样，让我把表达出来的蛋白检测他们的交叉反映原性。差这方面的资料，也没找到。大家能不能帮忙以下。

作者: 831226 时间: 2013-10-22 16:05

我做的是一个抗癌化合物的机理研究

研究内容包括：

1. MTT、体内抑瘤试验
2. FACS测定线粒体膜电位、ROS
3. Hoechst染色观察凋亡形态
4. DNA ladder
5. western blot检测与凋亡相关蛋白的变化：bcl-2、bax、caspase-2、caspase-3、caspase-7、caspase-8、caspase-9、parp、bid、cyto-c

基本上就是这些了.

作者: ha111 时间: 2013-10-22 17:42

大家做得真丰富!
俺也支持一下版主:
课题:探讨肺癌组织与正常肺组织中有表达差异的蛋白质及其功能研究.
我只能做课题中的一部分.
首先,已经利用二维电泳技术找到一些表达差异显著的蛋白质,并通过质谱技术分析出了这些蛋白.
现在,从中选取了几个老板感兴趣的蛋白质,通过细胞培养进一步验证,并利用Western-Blot观察蛋白表达趋势.
下一步,做几个蛋白的功能研究.
再往后,我就毕业了.哈哈....

作者: 831226 时间: 2013-10-22 17:43

我的课题是将一种副黏病毒科的蛋白分段表达（在大肠中）后，再用ELISA的方法鉴定这个病毒的抗原决定簇在那一段，反正是超级无聊的实验，整天琢磨着怎样表达蛋白，并且是可溶的。慢慢看着青春远去“冯唐易老，李广难封”，不知那天老板才给个感兴趣的课题。

作者: hulu呼噜 时间: 2013-10-22 17:44

相关疾病：
急性肾衰竭
我也来说说：我的课题比较浅，主要是研究载脂蛋白M在急性肾衰大鼠的表达以及核因子-κβ对其表达的影响。研究方法：
1.Western-blotting测蛋白表达
2.Real time-PCR检测目的蛋白的mRNA表达
3.Dot-blotting检测血浆、尿液中载脂蛋白M的含量
4. ELISA检测血浆中相关细胞因子的含量

作者: mimili_901 时间: 2013-10-22 17:45

本人做的是家蝇的抗菌肽，测序的成功报道不多，G75分离纯化后测其广谱活性，并且最终目的还是测其活性，过去测过几次都不成功，不知哪同学有测序成功经验，多肽测序把握比较大的公司信息。谢谢啦！

作者: mimili_901 时间: 2013-10-22 17:45

更正上个帖子，最终目的是测出氨基酸序列，哎！

作者: 831226 时间: 2013-10-22 17:46

也来说说哈
我的课题是在经过表面改性的纯钛表面界蛋白质，测试蛋白质的形貌变化，结构变化及结合力

作者: hustwb 时间: 2013-10-22 17:47

偶是新手,请各位老师指教.
偶做的是HSCs收缩的分子机制,或者分细胞或者用老板的细胞株.
无非就是两三条信号通路的检测,
实验方法有:isometric tension measurement
SDS-PAGE, glycerol-urea PAGE,protein kinase activity assay,
还有可能做 RNAi , 免疫荧光高内涵筛选
看有没有时间喽!
希望多和大家交流!我很喜欢DXY,让我学到很多东西.

作者: bluelake 时间: 2013-10-22 17:47

俺做的是蛋白质组方面的。
我用的材料是两种不同耐药浓度的细胞系。耐MTX！
对这两种不同浓度的细胞系，进行2D分析。找到这两个细胞的差异表达蛋白。然后分离，鉴定蛋白。找到蛋白后，再进一步分析它与MTX耐药的关系。
方法有，2D，质埔分析，Western－blot

作者: Ao7 时间: 2013-10-22 17:47

俺也来支持一下版主。
我做的是从一种植物中提取的具有抗癌活性的蛋白质。
当然首先得进行提取分离，由于是从总蛋白中分离，分离就有些难度，至少对我们这儿来说；
然后MTT，进行体外抗癌活性实验，得到IC50值；这方面的数据基本上做完了，做了十来种细胞株。
通过查文献结合实验数据比较，我猜测我们现在做的这个蛋白应该属于RIP（核糖体失活蛋白）。近期我想通过质谱酶解方法测出部分序列。因为到目前还不知道其全序列。如果有这质谱测序方面的高手，帮我给点建议！谢谢。

作者: owanaka 时间: 2013-10-22 17:48

蛋白质组学是我课题的一个方面：
我的课题：不同的造血微环境对诱导人类胚胎干细胞向造血系统分化的影响
检测方法：
1. 从表面抗原和诱导效率检测三种基质诱导人类胚胎干细胞向造血系统分化的差别
2. 通过基因芯片在基因水平比价三种基质的差别
3. 通过基因芯片的结果，在蛋白质水平找出三种基质的区别
目的：模拟体内造血发生过程，为建立一种稳定高效的诱导体系做基础

作者: fox_79 时间: 2013-10-22 17:48

我做的是一种药物的抗癌机制
已经完成的工作
（1）筛选合适的药物浓度
（2）MTT法检测药物对癌细胞的抑制效果
（3）PI染色流式细胞仪检测细胞周期的该变，发现药物使细胞停留在G2/M期
药物对肿瘤的抑制包括2方面，一是诱导细胞凋亡，二是抑制细胞分裂，我做的药物主要是第二种机制，接下来的工作：
（1）Western-blotting检测G2/M期相关蛋白（p21,cyclinB,wee 1,cdc25c）看究竟该药物是作用于哪一条信号通路，与G2/M停滞有关的信号有p53依赖性的和p53非依赖性的两种。
（2）如果与p53有关，转染p53野生型和SiRNA的载体，再检测加药后细胞周期的变化。
最终目标：搞清该药物导致细胞停留在G2/M期的分子机制

作者: xue258 时间: 2013-10-22 17:48

我是做蛋白质的相互作用的，用的而是酵母双杂交
1.先构建一个BAIT质粒
2.将构建的质粒转化进酵母菌株，在和文库进行杂交筛选。
3.筛选到的阳性克隆做生物信息学分析，
4.具体对感兴趣的阳性克隆做具体的相互做用为点的具体定位分析。

作者: 3N4G 时间: 2013-10-22 17:49

说说我的：

我实验课题是*癌组织蛋白质组学

实验步骤如下：

1.取*癌组织及癌旁组织，提取组织总蛋白。

2.跑一向电泳，即根据蛋白质等电点等电聚焦。

3.平衡后，二向电泳，根据蛋白质分子量跑SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使蛋白点分离。

4.染色：有多种，经典考染，银染等，现在可用荧光染色，但较贵。我准备用经典考染，蛋白质上样量较大，有利于后来的质谱分析。

5.扫描仪分析，找*癌组织及癌旁组织差异蛋白

6. 差异蛋白切胶后质谱鉴定。肽指纹图或肽序列质谱进相关数据库搜索

7.找到新的或已知蛋白。

8.研究它们和肿瘤的关系，试图找到新*癌marker。

说起来简单，做起来就难了，具体实验中有很到问题和细节。

各种实体瘤方法大同小异，本人就未写明我的具体研究对象了，请各位斑竹和战友谅解！也建议蛋白组的战友多交流

作者: any333 时间: 2013-10-22 17:49

相关疾病：
肾小球肾炎
说说我的课题啊，希望得到宝贵的一分
某中药单一成分的分子作用机制
1、建立肾小球肾炎动物模型、免疫低下模型
2、成膜后给药
3、取肾小球肾炎模型的肾脏，免疫低下模型的脾脏，采用western-bloting测定组织中的NF-kappaB，Ikk，I-kappaB值。
4、考察模型组与给药组中各值，进行统计学分析，验证该药的分子作用机理。
——————————完毕！

作者: cwcwcww 时间: 2013-10-22 17:51

支持版主，我主要是作重组蛋白质纯化工艺的筛选和确定，以及工艺改进这方面工作的。领域比较窄，比较难发表论文，但我认为还是蛮有意思的。现在我常用的纯化技术主要有离子交换层析、分子筛、疏水层析、反相层析、金属离子螯和亲和层析以及超滤技术，希望大家多多指教。

作者: ffaa 时间: 2013-10-22 17:51

目前的课题之一是克隆表达纯化DNA repair蛋白，探讨酶与底物的关系，比如Km,Vmax,Pmax,T50等值的测定。
请描述得再详细些

作者: glass 时间: 2013-10-22 17:51

好像还没有做单链小分子抗体的DXYer来此报道。我现在做的就是这方面的课题。是导师的一个基金项目。路线基本上比较明确，由人淋巴细胞总RNA逆转录为cDNA，扩增轻链和重链可变区建立scFv库，然后以特定抗原进行筛选，找到亲和力高的scFv，再突变为dsFv，研究其活性部位及生物学功能。目前尚出在建库阶段。遇到一些问题，前面尚有很多未知的难点等着我。所以做起来也是战战兢兢的：）不过心态已不是硕士时候的那样悲观消极了。谢谢各位，希望得到你们的帮助！

作者: finger 时间: 2013-10-22 17:52

支持一下版主。

我的课题是研究大鼠心肌梗塞后运动对大鼠心脏功能以及左室重构的影响

大致步骤:
1. 大鼠心肌梗塞动物模型的建立；
2. 模型建立成功后不同时间给予运动锻炼；
3. WESTERNBLOT检测蛋白水平的变化情况；
4. Real-time PCR检测mRNA水平的变化情况。

作者: eve_49 时间: 2013-10-22 17:53

我做的是病毒囊膜蛋白与宿主膜蛋白的相互作用，期望找到受体或者相互作用蛋白。希望能跟做这方面的师兄师姐相互交流一下。
鼓励新战友发帖

作者: 小野花 时间: 2013-10-22 17:53

我也说说吧
我做的是幽门螺杆菌的克隆，表达，以及精制和精制后的抗体试验

目前克隆工作已结束，表达情况不是很乐观，可溶性很差，大部分为包涵体，还好不要求有活性，不过包涵体是沉淀，而且跟医学相关的dd都有buffer要求的，所以又要进行包涵体复性实验。。。。。。
总之一波多折啊！

作者: huifeng0516 时间: 2013-10-22 17:53

我也谈谈我的课题
我做的是转基因产品的免疫学检测方面
大概步骤：
1、将转基因产品的外源基因在大肠杆菌中表达（该转基因产品现在已商业化生产）
2、提取目的蛋白，纯化、复性
3、免疫兔子，制备多克隆抗体
4、免疫小鼠，制备单克隆抗体
5、纯化单抗、多抗，做Western blot
6、采用双抗体夹心ELISA建立检测方法
7、评估该方法（检测限、有效性、灵敏度、重复性等）
8、胶体金标记抗体，做成试纸条
现在已做到第6步，抗体的质量挺好的，建立ELISA的方法应该没问题了。
这一年来实验挺顺利的，学到很多东西，丁香园也给我提供了很多帮助，谢谢。

作者: xingyi08 时间: 2013-10-22 17:54

也说说我的课题吧,
是在别人构建好的大肠表达的蛋白酶的基础上来作,因为签了保密协议,酶不便透漏,具有抗氧化抗辐射防癌变等多种功能
1,改进或者探索适合批量从发酵液中纯化该蛋白酶的方法
2,纯化的蛋白酶一方面用来结晶,研究其结构
3,另外一方面研究其各种理化性质,常规的表征数据如稳定性等电点等都要做的,而且要与别的类似物同时比较着做
4,利用该蛋白酶做细胞试验验证其抗氧化抗辐射等多种功能
5,利用该蛋白酶做动物试验验证其抗氧化抗辐射等多种功能
6,将该酶进行酶切再纯化得到另外一种类似蛋白酶同时进行上述试验
比较其结构与功能的差异

目前有些顺利有些不顺呀,

作者: 7437654 时间: 2013-10-22 19:21

分离纯化一种酶

作者: PINK 时间: 2013-10-22 19:22

我的课题:脑组织的蛋白质研究:
1、建立模型。
2、提取脑组织总蛋白质。
3、双向电泳获得漂亮图谱。
4、专用软件筛选出差异蛋白质。
5、质谱分析，获得肽指纹图谱。
6、数据库搜索，得到相应的蛋白质。
7、再进行验证。

作者: PINK 时间: 2013-10-22 19:22

浅谈：蛋白质组学中蛋白质样品的提取十分重要。
裂解液含有变性剂、表面活性剂、还原剂、两性电解质以及蛋白质酶抑制剂等。其基本成分包括：尿素，一种或几种去污剂。尿素是一种中性促溶剂，能使许多种蛋白溶解并展开来，形成完全随机的结构，所有的离子基团暴露在溶液中。对于较难溶解的蛋白，使用硫脲可以显著增加其溶解性，尤其是膜蛋白，由于其水溶性差，而在尿素浓溶液中其可溶性很好，因此，尿素-硫脲合用提高了溶解样品的能力。还原剂DTT也可增强样品的溶解性，它可以断裂二硫键，以保持蛋白处于一种还原状态。载体两性电解质（carrier ampholytes）通过电荷与电荷之间的相互作用减少蛋白聚合来增强其溶解性。为了确保样品的完全溶解和防止通过疏水反应而使蛋白质相互作用导致蛋白质聚合。在样品溶液中必须使用非离子或兼性离子去污剂。兼性去污剂CHAPS效果较好。SDS作为阴离子去污剂，对于膜蛋白的溶解非常有效，但由于其阴离子特性，必须和其它去污剂合用。样品预处理过程中，超速离心将核酸去除。为了防蛋白质水解，还需加蛋白酶抑制剂，由于每一种蛋白酶抑制剂仅对一类蛋白酶发生作用，所以，我们采用由EDTA，PMSF等组成的复合蛋白酶抑制剂，其中，PMSF不可逆抑制丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶，EDTA抑制金属蛋白酶，获得了比较理想的结果。

作者: mimili_901 时间: 2013-10-22 19:23

我的课题是主要包含三方面的内容
第一细菌的全菌蛋白的2-DE.
第二免疫蛋白组学
第三蛋白的表达纯化

作者: ququer787 时间: 2013-10-22 19:24

我的课题与上面有的战友很像，疾病不同罢了
1 某种疾病与正常对照的差异蛋白表达（蛋白芯片，师姐在公司做的），找出差异表达明显的几种。
2 进一步研究这些“新蛋白”的功能及鉴定（蛋白分离及纯化、染色、切胶、质谱分析鉴定、数据库检索，粗略想法是这样）
3 多中心大样本验证，最终找出该病的诊断标志物。
但我与老板都是临床医生，这些深奥的知识以前根本不懂，目前有点无从下手的感觉，希望有明白的高人指点或交流啊。
也盼望宝贵一分，呵呵。

作者: zhenxin 时间: 2013-10-22 19:25

俺也说说：
1. 蛋白质在教母，S2细胞中的表达
2. 蛋白质结晶及结构解析，功能结构分析

作者: utt0989 时间: 2013-10-22 19:25

我也要建立双抗体夹心ELISA检测方法,什么东西都具备了,但不知如何下手做,有谁能帮帮我吗?

作者: ritou1985 时间: 2013-10-22 19:26

我也说说
先是mtt找出药物处理细胞的最佳剂量,然后用药物处理细胞,进行2D分析,然后差异表达蛋白。质谱鉴定,对感兴趣的蛋白再分析其基因、药物和细胞之间的关系等。

作者: uuooii 时间: 2013-10-22 19:27

哈哈,苦啊,看来做蛋白组学的人好多啊,我做细菌的蛋白组学比较两个株的毒力.现在也很郁闷啊

作者: ukonptp 时间: 2013-10-22 19:28

RUNNING TITLE

Characterization of Chlamydia Pneumoniae proteins and the construction of vaccine to Chlamydia Pneumoniae infections

Get 192 fusion Chlamydia Pneumoniae proteins. The proteins in this project include four groups:

* Chlamydia Pneumoniae predicted Inc proteins using software online;

* Chlamydia Pneumoniae specific proteins;

*Heat Shock Proteins of Chlamydia Pneumoniae;

*Proteins belong to Type Three Secretion System;

*Some other important proteins as controls such as MOMPs, CPAF, MinD et al.

Goals

*Identify immunodominant antigens using protein array;

We will use microplates arrayed with 192 Chlamydia pneumoniae fusion proteins to evaluate antibody response in several atherosclerosis and asthma patients. We hope we can identify which Chlamydia antigens are relatively immunodominant based on both the antibody recognition frequency and titer.

*Locallize the Chlamydia pneumoniae proteins using IFA;

We make antibodies with mice and use these antibodies to do IFA to make sure the localization of proteins in this project.

*Understanding Chlamydia pneumoniae proteins functions;

Overall, we hope that I can get one or two immunodominant proteins then we can draw the conclusion that these proteins are really important in the infection of Chlamydia pneumoniae to people. Then we can say that these proteins are the promising candidates of the vaccine.

作者: bling 时间: 2013-10-22 19:28

谈谈我的：
1：mtt找出药物处理细胞的最佳剂量
2：AO/EB染色观察一下形态
3：流式检测药物对细胞周期的改变以及凋亡率的变化
4：wb检测相关的目的蛋白的变化

作者: JK.jon 时间: 2013-10-22 19:29

我也来谈谈我的课题部分内容
一种中药植物的蛋白质分析现在正在查相关资料
（１）提取植物蛋白质（应该是总蛋白，现在还没有搞清楚出现DNA的情况有没有影响）
（２）透析提取物，除掉大分子成分
（３）冷冻干燥，保证有一定的蛋白浓度
（４）做电泳（可能是毛细管电泳）
不知道这种设计方案有没有什么大问题，
希望各位同仁提点意见

作者: BOSS2011 时间: 2013-10-22 19:29

我也来说说，我的课题是《IGF-1在甘蓝质体中表达的研究》
目的：让IGF-1在甘蓝质体中高效表达，达到形成口服疫苗或生产IGF-1的目的。
步骤：1.IGF-1甘蓝质体表达载体的构建；
　　　2.通过基因枪对甘蓝实施基因遗传转化；
　　　3.抗生素筛选阳性植株；
　　　4.转基因植株的分子验证。
　　　5.IGF-1的分离，蛋白活性测定；
我是做甘蓝农杆菌组培转基因的，你是用基因枪方法吗？想请教下

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