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标题: 【求助】DH10Bac 感受态制备 [打印本页]

作者: nut6694 时间: 2013-10-27 12:01 标题: 【求助】DH10Bac 感受态制备

DH10Bac 感受态制备时需不需要加抗生素？如果需要是什么，浓度多少

作者: 98776langtao 时间: 2013-10-27 12:01

感受态制备应该不加抗生素吧。DH10Bac也是大肠杆菌的一种啊，我觉得依照平常制备感受态的方法制就可以了

作者: 04906 时间: 2013-10-27 12:02

DH10Bac是杆状病毒表达系统用的一个菌株吧？我印象中这个菌株是携带有一个质粒的。但不记得这个质粒是以溶原状态存在还是以游离状态存在。楼主请仔细看Invitrogen的说明书把这点搞清楚。如果携带的质粒是以游离状态存在的话，那我觉得制备感受态的时候，培养细菌的培养基里肯定要加抗生素，当然制备溶液比如CaCl2溶液中就没有必要加了。

作者: DNA 时间: 2013-10-27 12:02

QUOTE:

原帖由 04906 于 2013-10-27 12:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

DH10Bac是杆状病毒表达系统用的一个菌株吧？我印象中这个菌株是携带有一个质粒的。但不记得这个质粒是以溶原状态存在还是以游离状态存在。楼主请仔细看Invitrogen的说明书把这点搞清楚。如果携带的质粒是以游离状态存 ...

严重赞同!
不过,DH10Bac是携带有两个质粒的,都是游离状态存在.
培养细菌的培养基里要加两种抗生素. 感受态细胞制备方法和别的细菌一样.

作者: qiangren789 时间: 2013-10-27 12:03

我做DH10Bac制备感受态细胞时没有加任何抗生素

作者: lixi559 时间: 2013-10-27 12:04

感受态细胞本身是没有抗性的，在转化进载体以后才显示载体的抗性，因此，制备感受态细胞时是不需要加抗生素的。

作者: mod=8048 时间: 2013-10-27 12:05

DH10Bac在活化时是需要加抗生素的，我加的是卡那霉素

作者: 月牙牙 时间: 2013-10-27 12:05

制备感受态时不需加抗生素，作转化后，培养基要加被转化质粒所携带的抗性标记的抗生素。

作者: 莓菓333 时间: 2013-10-27 12:06

如果菌株本身带有质粒，制备感受态细胞的时候是应该加所带质粒的选择性抗生素的，比如BL21 (DE3) pLysS，加Cm，虽然麻烦一点（会长得慢一些），但这样能确保质粒不会丢失。不加可能也可以，但是难保所带质粒不稳定，会降低效率的。

作者: boom 时间: 2013-10-27 12:06

要加卡那霉素和四环素

作者: 云端ing 时间: 2013-10-27 12:07

Dh10ac里面有Bacmids和helper，必须加卡那霉素和四环素，不然Bacmids或者helper丢失后期转染会失败，少加一种都会导致不转染

作者: 云端ing 时间: 2013-10-27 12:10

Gentamicin 终浓度7微克每毫升
Tetracycline终浓度10微克每毫升

作者: 生物小白mm 时间: 2022-2-28 14:44

我准备制备DH10的感受态细胞，但是我在培养基里加了四环素和卡那霉素后菌摇不起来，请问这是什么原因导致的啊

作者: chenzhen2016 时间: 2023-7-14 16:59

在DH10Bac感受态制备过程中，需要添加一种特定的抗生素——tetracycline（四环素）。

具体操作步骤如下：

在感受态培养基中添加适量的tetracycline（四环素）抗生素，通常浓度为10-20 μg/mL。
向含有DH10Bac细胞和Bacmid DNA的感受态细胞培养基中添加该抗生素。
进行感受态培养条件下的培养和孵育。
添加tetracycline抗生素的目的是选择性地抑制非重组体（未成功插入转基因DNA的细胞）的生长，从而增加重组体（已成功插入转基因DNA的细胞）的比例。

需要注意的是，具体的抗生素浓度可能会因实验条件、实验目的或实验方案的不同而有所变化。因此，在使用DH10Bac系统进行感受态制备之前，建议参考相关的文献、协议或厂家提供的指南，以获取准确的抗生素浓度和使用方法。https://dgsupera100.com/

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