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标题: 【求助】18%的Tricine-SDS-PAGE的配方？ [打印本页]
作者: njkph    时间: 2013-11-9 20:36     标题: 【求助】18%的Tricine-SDS-PAGE的配方？

[size2]请知道的同学麻烦告诉我一下，谢谢！
作者: nikun230    时间: 2013-11-9 20:37



QUOTE:
原帖由 njkph 于 2013-11-9 20:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请知道的同学麻烦告诉我一下，谢谢！

参考
Tricine-SDSP-AGE电泳分析小分子多肽的文章
作者: njkph    时间: 2013-11-9 20:37     标题: 回复 #2 nikun230 的帖子

可是这篇文章里面并没有我所要的１８％的ＴＲＩＣＩＮＥ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的配方呢，不晓得哪能找得到呢？
作者: dreaming    时间: 2013-11-9 20:38


18%SDS-PAGE（10ml）
H2O 1.3ml
30%ACR 6ml
1.5M Tris－HCl（pH8.8） 2.5ml
10%SDS 0.1ml
10%APS 0.1ml
TEMED 0.004ml

建议用高电压跑胶，200v左右吧！在溴酚蓝跑出后再多跑10分钟左右！
作者: njkph    时间: 2013-11-9 20:38


请问楼上,你告诉我的是用来跑小分子多肽的18%的Tricine-SDS-PAGE的配方吗？里面用到了ＴＩＳ－ＨＣＬ，可不可以用ＴＲＩＳ代替呢？那样的话配方改为多少呢？还有在你跑胶一般要花多长时间？你的上样缓冲液中用的是溴酚蓝，我用的是考马斯亮蓝，那么指示作用是不是用一些不同？谢谢！
作者: birdfish    时间: 2013-11-9 20:39


这是分离胶的配方，那基层胶的那
作者: vcve    时间: 2013-11-9 20:39


如果分离胶要配到１８％，不如改做ＴＲＩＣＩＮＥ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，
我做的具体是：分离胶１６％，基层胶１０％，浓缩胶４％。效果不错。
作者: nikun230    时间: 2013-11-9 20:40


这里有个tricine－SDS-PAGE配方，应该可以满足你的要求！

图片附件: 59680592.jpg (2013-11-9 20:40, 58.74 KB) / 该附件被下载次数 44
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=20185

作者: nikun230    时间: 2013-11-9 20:40

这是使用方法！

图片附件: 81998256.snap.jpg (2013-11-9 20:40, 99.98 KB) / 该附件被下载次数 31
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=20186

作者: njkph    时间: 2013-11-9 20:41


谢谢大家的回复,我想有一点我可能没说清楚,我是要跑tricine-SDS-PAGE,只是在找１８％的tricine-SDS-PAGE的配方，并不是１８％的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的配方．还想请问一下,你的电泳条件是多少呀？我用的是ＢＩＯ－ＲＡＤ系统，胶只有７５ＭＭ．你有小分子量的蛋白ＭＡＲＫＥＲ吗？在哪个公司买的？售价多少呢？还有你用的上样缓冲液中的染料是溴芬兰还是考马斯亮蓝呢？
作者: guagua    时间: 2013-11-9 20:44


我做了两个多月的ＴＲＩＣＩＮＥ了，出来的效果非常好。
（图在实验室的电脑里，明天贴上来）
用的也是ＢＩＯＲＡＤ的电泳仪，７５ＭＭ，小分子ＭＡＲＫＥＲ是１４－９７Ｋ的，售价我不太清楚，不过可以到问实验室的人员。

５Ｘ的ＬＯＡＤＩＮＧ　ＢＵＦＦＥＲ，溴汾兰。

用新配的阴极和阳极缓冲液，大约跑三小时。

我们实验室都用恒流跑，一块胶２５－３０mA,如果是两块，就用６０，电压调到最大。

在园里有时会看到战友提醒用恒压跑，不可用恒流，因为自己一直是用恒流跑的，而且效果不错，所以真有点胡涂了。
作者: guagua    时间: 2013-11-9 20:44


法玛西亚的小分子ＭＡＲＫＥＲ，分子量从２Ｋ－１７Ｋ，你可以观注一下。
另外，贴张ＴＲＩＣＩＮＥ的电泳图。供你参考。

图片附件: 75655434.snap.jpg (2013-11-9 20:44, 10.58 KB) / 该附件被下载次数 6
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=20187

作者: finger    时间: 2013-11-9 20:45

很漂亮的电泳图,能问一下什么是阴极和阳极缓冲液,他们的配方有什么不同?分别加在电泳槽的什么位置?另外除了分离胶和浓缩胶以外,基层胶又是怎么回事?怎么灌胶?问题很菜,但是还是请多多指教!
作者: njkph    时间: 2013-11-9 20:46


阴极缓冲液中多了TRICINE和SDS，阴极缓冲液加在内槽，阳极加在外槽。三层胶从下到上依次是分离胶、隔离胶和浓缩胶。
作者: bluelake    时间: 2013-11-9 20:47

电泳是是个细致工作，从玻璃板的清洗到胶的灌注，都需要很细心才可。关键要靠自己去做，去摸索总结。
作者: biabiade    时间: 2013-11-9 20:49


这也是我想问的，分子量太小，压不成带啊。



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