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标题: 不做同位素标记，但用D20溶解，能否检测出样品中的物质 [打印本页]

作者: 以诺-约瑟 时间: 2010-6-9 14:14 标题: 不做同位素标记，但用D20溶解，能否检测出样品中的物质

各位好，我要通过测定底物和产物的含量变化，来确定一个酶反应是否发生。
资料上写着反应后将体系冻干，就是去除水分，然后用D2O溶解，再做NMR分析。但没有提及反应底物是否做同位素标记。
我想问一下：
（1）底物不做同位素标记，只将最终冻干体系用D20溶解，能用NMR法测定出来里面都含有什么物质吗？
（2）是用D20溶解，就意味着要用氢谱吗？500MHz是氢谱范围吗？
谢谢

作者: aa_tang 时间: 2010-6-9 14:14

从楼主描述的情况来看，是想利用NMR来监测酶促反应。重水在这里只是作为溶解样品的溶剂，利于在NMR分析时，匀场、锁场等，用NMR来监控反应，关键是找出底物和产物的特征化学位移，看相应位移处峰的增长和降低直至消失。通常是做H谱啦，做起来简便快捷。。

作者: sseia42 时间: 2010-6-9 20:41

有D2O溶解后你测C谱氢谱或其它谱都行，你也可以有其他溶解来做，对结果没影响（当然如果不溶测不出信号），500MHz不是氢谱范围，是衡量核磁仪的一个重要指标，我们常用的都是400MHz，LZ的比常用的高档啊，分辨率也更好。

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作者: 命运--ses 时间: 2010-6-9 20:41

500MHz是氢核在磁场中的共振频率，不是氢谱范围

作者: 健康千万家 时间: 2010-6-9 20:41

500M是氢的共振频率，用D2O溶解，除了做氢谱，也可以做碳谱。

我不知道你说的底物做同位素标记与NMR检测有什么关系？

作者: dxkuii 时间: 2010-6-9 23:03

朋友，先看看基础有机，对你有好处

用氢谱，把氢氘化做什么

作者: zxlyid 时间: 2010-6-9 23:04

500M是核磁仪器的指标，越高越好。
氢谱可以检测出样品里氢的种类和含量，具体说是氕的含量。
重水会可能与样品上的活泼氢发生交换，使活泼氢出峰，因为氘是不出峰的。

作者: uwku58h 时间: 2010-6-10 09:54

氘代的前提是化合物中有活泼氢。可以跟测试老师好好沟通一下。学生物的同学做核磁，难为你了！

作者: dairongji 时间: 2010-6-11 09:17

用NMR可以分析，但是效果不好，最好采用HPLC分析

作者: sslin 时间: 2010-6-12 09:17

1. 核磁共振检测不必同位素标记. 例如检测 13C 或 15N. 如果有同位素标记, 或叫做富集的碳或氮, 检测起来几分钟就可以得到清晰的谱图. 如果没有同位素标记, 则需要检测久一些. 对于 13C 谱, 100 mg 的样品检测约需 15 分钟, 如果只有 5 mg, 检测则需要将近 10 小时.
样品溶于 D2O 可以检测氢谱. 氢谱可以得到含氢化合物的信号峰, 从而推测化合物结构. 检测碳谱可能因为化合物含量太少, 信号不清晰. 氢谱检测也可能由于样品不是纯品, 会出现信号峰重叠, 在信号峰的归属方面存在一定的困难. 需要有一些怀疑含有而知结构的化合物氢谱作对照比较.

2. 用 D2O 溶解可以检测氢谱, 也可以检测碳谱或氮谱. 使用氘代试剂主要是用来检测氢谱, 避免溶剂的氢干扰氢谱中化合物的氢信号.
500 MHz 和氢谱范围是两回事. 目前流行的超导磁体有 200, 300, 400, 500, 600 MHz 谱仪, 他们之间存在的不同仅是磁体磁场的强度. 磁场愈强, 检测信号峰的灵敏度以及分辨率就比较好. 和检测的界面或操作, 以及检测范围无关.

作者: Erica2088wr 时间: 2010-6-12 18:03

500MHz 指的是氢核的频率，这台一起如果做碳谱的话，频率是125MHz左右，如果做氘核的话约是500/6 MHz

作者: amelican_beauty 时间: 2010-6-12 18:04

QUOTE:

原帖由 以诺-约瑟 于 2010-6-9 14:14 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
各位好，我要通过测定底物和产物的含量变化，来确定一个酶反应是否发生。
资料上写着反应后将体系冻干，就是去除水分，然后用D2O溶解，再做NMR分析。但没有提及反应底物是否做同位素标记。
我想问一下：
（1）底物不做同位素标记，只将 ...

用氘代试剂溶解样品是为了用于核磁锁场，锁场是采集核磁谱图的前提，所以必须采用氘代试剂将样品溶解，才能进行核磁测试。溶解后可以做氢谱，也可以做碳谱，这个看个人需要了。楼主的样品估计是蛋白质类物质吧，一般来讲，蛋白质物质在氘代水中测不出活泼氢的信号，比如一些氨基，羧基氢等，所以没有办法积分定量得到产物和底物的相对含量。我们做的时候往往用氘代水和水的混合溶剂，混合比例一般为 90/10，这样可以保持锁场，然后做压水峰实验，就能得到样品中所有氢的信号。楼主也可以做碳谱，然后积分求各个组分的含量，但是有的碳谱积分是没有意义的，不能反映真实的信号比例，这个得问问老师，定量碳谱用哪种方法，如果我没记错的话，好像定量碳谱得用门控去耦的方法才能对碳谱定量，楼主还是多问问做测试的老师吧，呵呵。

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