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标题: 【求助】请教蛋白浓缩的柱子或试剂盒或简便方法 [打印本页]

作者: 冰儿0109 时间: 2013-11-21 17:27 标题: 【求助】请教蛋白浓缩的柱子或试剂盒或简便方法

做WB发现目的条带很淡，想浓缩样品，加大上样量，请问各位有什么好的建议，关于蛋白浓缩的柱子，或者试剂盒，或者简便易行的方法？非常感谢！

作者: linlinstar 时间: 2013-11-21 17:28

几种方法：

1、超滤离心管：根据目的蛋白的分子量选择相应的型号和体积，一般MillPORE，Sartorius做的都可以，选用平转子的离心机，低速。

2、冷冻干燥法：根据实验室的设备条件进行，操作简单。

3、CaCl2干燥法：在透析袋中装入的蛋白溶液，用CaCl2处理透析袋。PEG(聚乙二醇)，或者蔗糖都可以替代。

作者: 冰儿0109 时间: 2013-11-21 17:28

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原帖由 linlinstar 于 2013-11-21 17:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

几种方法：

1、超滤离心管：根据目的蛋白的分子量选择相应的型号和体积，一般MillPORE，Sartorius做的都可以，选用平转子的离心机，低速。

2、冷冻干燥法：根据实验室的设备条件进行，操作简单。

3、CaCl2干燥法：在透析袋中装入的 ...

非常感谢，我要的就是这个！说得很清楚明了！
只是，平转子是什么？是指离心管是垂直放置的吗？倾斜一定角度的为什么不可以呢？

作者: linlinstar 时间: 2013-11-21 17:29

角转子不可以，这与超滤离心管的结构设计有关。你买回来看看就知道了

作者: 冰儿0109 时间: 2013-11-21 17:29

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原帖由 linlinstar 于 2013-11-21 17:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

角转子不可以，这与超滤离心管的结构设计有关。你买回来看看就知道了

那我就倒了，我们实验室都是有角度的,呜呜呜～

作者: sunnyB 时间: 2013-11-21 17:30

加一种：透析袋中装入要浓缩的蛋白溶液，两端用橡皮筋扎好，两头挂在铁架台固定的夹子上拉紧，找个电风扇开大风吹。只是为了做WB的话，用10ml溶液，浓缩到2-3ml，估计3个小时就可以了。

作者: 冰儿0109 时间: 2013-11-21 17:30

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原帖由 sunnyB 于 2013-11-21 17:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

加一种：透析袋中装入要浓缩的蛋白溶液，两端用橡皮筋扎好，两头挂在铁架台固定的夹子上拉紧，找个电风扇开大风吹。只是为了做WB的话，用10ml溶液，浓缩到2-3ml，估计3个小时就可以了。 ...

是个好办法，谢谢哦，只是我的蛋白只有几十微，太少了些。

作者: u234 时间: 2013-11-21 17:31

那我就倒了，我们实验室都是有角度的,呜呜呜～

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角转的可以的，millipore和赛多丽丝都有相关的产品。

作者: u234 时间: 2013-11-21 17:31

你可以用TCA沉淀你的蛋白再跑胶。

作者: youyou99 时间: 2013-11-21 17:31

有角度的也是可以的，只是转速不一样，看说明书吧。

作者: abc816 时间: 2013-11-21 17:32

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原帖由 youyou99 于 2013-11-21 17:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有角度的也是可以的，只是转速不一样，看说明书吧。

我用TCA浓缩了两次，跑胶结果不好，糊成一片，可能是TCA没洗干净。但不知道怎样才能洗干净？

作者: 冰儿0109 时间: 2013-11-21 17:32

你可以用TCA沉淀你的蛋白再跑胶。

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是啊，我也看到有这个方法，但是请问有具体的操作方法吗？谢谢

作者: bs4665 时间: 2013-11-21 17:33

我没用过TCA的方法，都是用超滤的方法。

但之前实验室有人用过TCA沉淀，好像效果还行，就是用一般的protocol，很容易找的。

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