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标题: 【求助】关于蛋白质预染marker的问题？ [打印本页]

作者: tie8 时间: 2013-12-2 16:50 标题: 【求助】关于蛋白质预染marker的问题？

看到一些帖子或资料，在做western blotting时用到了蛋白质预染marker，有助于确定蛋白转膜的效果，我想请问大家，有谁用过蛋白质预染marker吗？所谓的预染，是什么意思？是跑完胶，不用加任何的试剂就可以直接看到marker的条带吗？然后转膜后，在膜上也可以看到marker的条带，比较胶上的条带与膜上条带的亮度，就可以确定蛋白转膜的情况吗？
不知道我理解的对不对？刚刚接触western blotting，很多东西都不会，请多多帮忙！十分感谢！

听说国产的蛋白质预染marker效果都不是很理想，请问是这样吗？如果是买进口的蛋白质预染marker都哪个公司的比较好，价格也相对比较便宜的？

作者: kulee 时间: 2013-12-2 16:50

预染marker是一些纯化好的蛋白混合物，通过与染料共价耦连，在电泳过程中或转膜过程中可以观察到。
通过膜上marker的情况可以估计转膜的效率，但不是绝对的。
国产的是不好用，每次需要加很多，而且条带也不清楚，Sigma的不错。

作者: IAM007 时间: 2013-12-2 16:50

电泳的时候就可以看到预染marker，转膜后也可以看到膜上有条带。现在国产的一些预染marker效果也还可以，毕竟制造工艺不复杂。

作者: panda王 时间: 2013-12-2 16:51

嘿嘿，国产的怕还是不行，我刚买了一种八条带的国货，但是跑胶的时候怎么也数不到八条，指示作用很不理想，五六百块那。国外的我没用过不好说。

作者: xingyi08 时间: 2013-12-2 16:51

我刚刚买的预染maker，效果不好，好像被稀释了，条带也不清晰，好像被稀释了，上了10微升的量，也不是很好，有些同学说TAKARA的还好，你试试！

作者: JK.jon 时间: 2013-12-2 16:52

用过晶美的，还不错，

作者: tie8 时间: 2013-12-2 16:52

谢谢各位的回帖！我对预染marker有了一些了解，现在主要的问题就是定购哪家的预染marker了，请问还有哪位用过预染marker的，提供点信息，还有哪个公司的预染marker比较好？

作者: lxh031 时间: 2013-12-2 16:53

fermentas公司的也可以

作者: 如影随形 时间: 2013-12-2 16:53

我用的promega的不错！

作者: yayya 时间: 2013-12-2 16:53

我用过genview的预染,只有170块钱,虽然上样5ul有点看不清楚,但上10ul就相当好了,转到PVDF膜上也相当的清楚,呵呵,只是次数较要用的少了一半而已,我觉得还是值得的吧.进口(2000-3000)的一般相对的国产的贵,但上样量少,我觉得算下来还是国产的值得吧

作者: zhenxin 时间: 2013-12-2 16:53

预染 marker, 有2种：单色预染和多色预染。当然，多色预染比较容易辨认，一般都选择多色预染。

公司的选择，用过的几种marker比较，个人认为invitrogen的比较顺手，不过缺点是比较贵。

$$ 另一个重要问题，可以有目的性地选择，只要在你的蛋白大小最接近的那个条带是容易辨认的，当然这个就是上选。
我举个例子说明一下：比如，你的目的蛋白 20kd.
SeeBlue® Plus2 Pre-Stained Standard
invitrogen
LC5925
这个预染marker 在22kd处是粉色的，其余条带是蓝色，这就非常容易辨认了，一目了然，至于最后1，2个条带看不清楚，也没有大碍了。

祝好运！

作者: cj_mondy 时间: 2013-12-2 16:54

选择多色预染marker,我用的是BioRad公司的，每次上5-10微升就可以很清楚的看到条带。

作者: xingyi08 时间: 2013-12-2 16:54

我用晶美的,不错的,其中有一条红带的那种,跑胶的时候,就能看到各KD蛋白分离的情况,而且即使你不小心错过了一点时间,也可以依据红色的那条带来确定目的蛋白的所在.

作者: glass 时间: 2013-12-2 16:54

国产的效果真的不太好，最近跑胶用的上海产的，说明书说让上样10微升，但是加大到20微升后都不清楚，而且，基本上很难跑出6条来

作者: wu11998866 时间: 2013-12-2 16:55

NEB得挺好。

作者: vvmmoy 时间: 2013-12-2 16:58

invitrogen的不错哦

作者: uuooii 时间: 2013-12-2 16:58

上海生工的就不错,我正在用

作者: ffaa 时间: 2013-12-2 16:59

Biorad 2ul/gel

作者: 6327555 时间: 2013-12-2 16:59

推荐fermentas的，很清晰，每次3ul就可以很清楚了，在72KD处是红色的，也不是很贵，2*250ul好像是五六百吧。

作者: one 时间: 2013-12-2 17:00

在这里问一句，做Western一定要用预染marker么，现在有新型的marker，能够和目的条带一起在胶片上显色的marker，用起来岂不更好用。

作者: 2541 时间: 2013-12-2 17:00

不知道楼上说的新型marker价钱怎么样？要是价格合适的话我想大家肯定会用的。

作者: kswl870 时间: 2013-12-2 17:01

100次￥500，40次￥240，还是很实惠的吧，
cuturl('http://www.jinsite.com.cn/protein_marker.html')

作者: 30moonriver 时间: 2013-12-2 17:03

我用过联科的和fermentas公司的，都不错，只要5ul就够了

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