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标题: 【求助】兼容MALDI质谱的银染方法 [打印本页]

作者: yjf1026 时间: 2013-12-18 17:12 标题: 【求助】兼容MALDI质谱的银染方法

请问有谁有兼容MALDI 质谱的银染方法啊，我最近都是用胶体考染染色，感觉点比较少，好像现在有兼容质谱的银染了，有谁用过吗？可否分享下经验，谢谢噢~~~

作者: utt0989 时间: 2013-12-18 17:13 标题: 回复 #1 yjf1026 的帖子

看不懂你说的意思，大概可以说下银染出来的胶体对质谱如MALDI来说影响很小的，而且不用脱色即可消化然后鉴定，但一般来讲银染灵敏度高，所以染出来的样品一般含量少，丰都低，不利于鉴定，一般情况一级还可以鉴定出来，二级（TOF/TOF)就很难打出漂亮的峰图来,上扬两大的话无论银染还是考然都会打出很好的峰图的

作者: 2541 时间: 2013-12-18 17:13

考染上样量加大到银染的5倍左右，做出来的效果也会挺好的，和银染不相上下

作者: 2541 时间: 2013-12-18 17:15

小区域内考染和银染比较效果图！

图片附件: 29115635.jpg (2013-12-18 17:15, 36.94 KB) / 该附件被下载次数 9
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=21673

作者: gogo 时间: 2013-12-18 17:15

相关疾病：
头痛
你可以用银染做分析胶
进质谱在做一份制备胶（考染）就好！
不过感觉银染重复性不太好，可能步骤太多，很多试剂要现配，批次之间难免存在误差！
最近就遇到了这个头痛的问题！

作者: yjf1026 时间: 2013-12-18 17:16

这两天也考虑了银染重复性的问题，想想还是从别的地方找原因吧，呵呵

作者: 2541 时间: 2013-12-18 17:16

个人还是觉得直接用考染分析，用考染鉴定，银染确实比较麻烦，而且点太多的话，不一定利于分析，因为图谱就这么大，太多了会影响分析的！考染做的好的话，分辨率比银染差不了多少!

作者: one 时间: 2013-12-18 17:17

Bio-rad 有一个银染试剂盒就可以与质谱测序兼容。

作者: pengke1983 时间: 2013-12-18 17:17

30-50ul 30mM K3Fe(CN)6:100mM Na2S203=1:1(V/V)加入胶块内，洗脱至蛋白质棕色消失，去除上清，立刻加200ul水终止反应，10min后，去除上清，再加入100ul 100mM NH4HCO3，静置20Min 去除上清。

作者: yjf1026 时间: 2013-12-18 17:17

是没有影响，不过操作复杂，重复性不很好，而且打点成功率视乎比较低，呵呵~~SO~~

作者: PCR 时间: 2013-12-18 17:18

呵呵银染对MALDI没什么影响的老大

作者: PCR 时间: 2013-12-18 17:19

操作比考染少了脱色一步啊，操作简单，打点成功率低的原因是因为上样量小，你用考染的上样量银染，像你所说的重复性不好就不会出现了，呵呵O(∩_∩)O~

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