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标题: 【求助】请帮忙分析下我的染色体图片 [打印本页]

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:40 标题: 【求助】请帮忙分析下我的染色体图片

1 、为什么我做的染色体分散不是很好？

我用的是0。075M的低渗液低渗了25分钟。难道还不够吗？

2 、为什么我的染色体很短呢？

我用的秋水仙素的浓度是0。04ug/ml处理2小时，难道还多了吗？

3 、平时各位照相是用什么倍的啊？我用的是400倍的，为什么都还不清楚呢？

请各位指导下，谢谢了。

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:41

24小时在线等待高手的指导啊，急啊，谢谢了

作者: 小游abc 时间: 2013-12-21 13:41

我做的还没你好呢，能告诉我你的具体方法及相关资料吗？非常感谢！跟你一样，急啊！

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:41

你去看看别人做的核型分析就有很多方法啊

很多资料的。

我直接买的培养液，你呢？自己配的吗？

快做吧，做好了来交流下

作者: 小游abc 时间: 2013-12-21 13:41

我是自己配的培养液，按照别人的方法做的，可是做不出来，最后染色不见染色体，只见一团兰紫色的奇怪的东西！

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:42

你把你的过程讲一下嘛，

我看看哪里可能有问题！！

作者: ilovegaga 时间: 2013-12-21 13:42

照片还可以就是不清晰擦一下镜头用油镜照片光有点暗调一下光用白光不要用钨灯或有一个滤光片改变一下有像差最好

至于蓝色的东西我估计不是染色体是染料吧

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:42

恩，谢谢了哈

我照相是一个原因，我还没熟练掌握。

处理的浓度和时间也是个原因，我前天又做了下

效果不错。

该天我再照两张照片来给大家看看。

我还做显带，希望大家继续给予帮助啊！！

作者: ii077345 时间: 2013-12-21 13:45

你做的是猫的染色体吗？

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:45

呵呵，我做的是猪的染色体，怎么猫和猪的染色体数目都相同吗？

麻烦你帮我看看，这中图片能分析了吗？

不能的话我明天再去找两张更清楚的！！

请问你是怎么分析的啊？

作者: ii077345 时间: 2013-12-21 13:46

用photoshop分析的，呵呵。

作者: ii077345 时间: 2013-12-21 13:47

用photoshop排的核型

作者: ii077345 时间: 2013-12-21 13:47

经分析你取样的猪是雄性猪，哈哈。

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:47

你简直太帅了，呵呵，确实是公猪的染色体哈。

快快，

讲讲你是怎么用那个软件来分析的？

怎么来测量来排序的？

终于遇到个高手了，谢谢了哈。

作者: ii077345 时间: 2013-12-21 13:48

我帮你排的核型没有经过测量计算，我只是根据形态大致分类排序，不一定很准确。请你根据测量计算结果重新排序。

作者: jiushikeshui371 时间: 2013-12-21 13:49

我最近照片出来了，正好要处理呢，真是太及时了

对了，虽然我不是遗传专业的，但是最近做了些染色体实验，所以给点经验给楼主，希望对你有所帮助

1.秋水仙素浓度应该要好好摸索，不同的物种，不同的细胞需要的秋水仙不同，一般是0.2－2微克每毫升，但是我们做细胞的如果细胞多，那就浓度大一点，如果细胞少就低一点，时间方面也要在1.5－2.5小时，你应该用不同梯度和不同时间点去摸索一下，没有定论，只要不要太离谱就行，当看到多数细胞又亮又圆又比较大就行，我摸索了至少五次才基本摸索到呢

2.低渗处理时间太短，有些都用灭菌蒸馏水处理呢，所以你可以适当延长低渗时间，一般是30到40分钟，或者用多一点低渗液，我们做细胞可以在镜下控制，看到细胞一个个胀鼓鼓的差不多要飘起来了应该就可以

3.离心不要太多次，也不要太高转速，试想细胞低渗后都很大很脆弱，所以我看书上有的是用静置去上清的方法，我觉得也很有道理，效果还行，每次静置要半个小时以上

4.滴片后最好要迅速过火，在酒精灯上烤得半干再放到80度烤箱，这样的话细胞染色体容易跑出来并且跑得比较开，但是注意固定液里有甲醇，是易燃的，我就烧到手了，幸好发现及时，所以为了做实验还是要拼一拼啊

5.染色最好用放了很久的吉姆萨染液，而且洗的时候是将玻片放在有蒸馏水的大容器里，轻轻的摇晃玻片，洗三遍水就差不多了，但是千万不要直接把水加到玻片上，否则染色体可能冲到一块去

希望我的经验对你有帮助，也希望版主加分让我突破“单位数”，也可以好好开心一下，谢谢

作者: 没良心55 时间: 2013-12-21 13:50

呵呵，二位战友的支持。

我现在做的染色体感觉都是上面那样了，就光看看还可以，但是做核型分析感觉就差了点。

浓度我试了0.02-0.4

时间我试了1-3小时

楼上你的低渗方法和考片我很感兴趣，下次我一定试试。谢谢了

作者: idoww 时间: 2013-12-21 13:51

我制作过人的染色体核型分析，一般用的是G显带或高分辨现代的方法，我看LZ给的图应该就是秋水仙素处理的中期核型做的吉姆萨染色，没有显带观察。

1. 低渗的时间差不多了，低渗完了吹打也很重要

2. 低速离心是没有问题的

3. 预固定和固定吹打动作要轻，时间不要太长

4. 冰冻处理过的玻片在垂直30cm左右滴片，分散较好

5. 楼主做的片子应该算不错的，显微镜和照相效果不太好

附G显带方法：

操作步骤：

1)将25毫升生理盐水和25毫升 0.02%EDTA溶液倒入立式染色缸内。

2)取2.5%胰蛋白酶溶液l 毫升加入上液内混匀，滴入1～2滴1 M氢氧化钠溶液至上液中，使pH达7.0～7.2。

3)将配制好的胰蛋白酶溶液置 37℃水浴箱中预热5分钟。

4)取染色体标本片，置入胰蛋白酶溶液中，轻轻摇动60～180秒。立即在生理盐水中漂洗两次。

5)以Giemsa 染色5～10分钟（37℃）用自来水冲洗、晾干。

6)镜检判断显带效果，在低倍镜下选择分散良好，长度适中的分裂相，再转至油镜下观察。若染色体边缘发毛，为显带过度；若染色体未出现带纹，则为显带不足。这时应根据具体情况再试一张标本片,适当增减胰蛋白酶处理的时间，直到满意为止。

作者: 扫雷军kuzi 时间: 2013-12-21 13:52

我们的方法最简单了70度烤片2小时啊，然后用0.4g/1ml的胰酶分带，分带用的是0.9％的氯化钠溶液，37度放置30min后加入胰酶分带。效果不错，早上制片，下午就可以出结果了。秋水仙碱浓度为：0.1ug/ml，

我们滴片很低啊，可能只有1-2ml左右，但是分散效果非常好啊。

作者: nvdabing 时间: 2013-12-21 13:52

方法基本都是一样的.主要是操作和试剂的配制方面有些许不同吧.

我们科室做的基本上都很好啊 .

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