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标题: 求助液相色谱出峰时间提前 [打印本页]

作者: lijing1403@163. 时间: 2010-7-26 21:42 标题: 求助液相色谱出峰时间提前

我使用的是安捷伦1200液相色谱平常我们用的是甲醇：流动相=6：94 苯甲酸山梨酸糖精钠出峰时间正常大约13分钟走完但是今天做时突然就提前出峰 5分钟就走完糖精钠跑到最前面去了峰形还好因为柱子才换了没多久所以不知道是什么原因

作者: huoche 时间: 2010-7-27 16:43

朋友应该是首次发提问，您目前使用的是在首页直接提问的形式，由于您未选择任何群组，因此您的问题可能，不能及时获得大家解答。
建议您先加入群组，然后再发帖，这样有助于您的问题获得专业的解答。详见cuturl('http://www.antpedia.com/faq-help/')

感谢您对分析测试百科网的支持！

作者: chenxiaohu 时间: 2010-7-27 17:56

朋友，你另外的流动相是什么？

作者: q_r_epcnge 时间: 2010-7-27 17:57

楼主，说下具体的流动相组成，或许是配制的流动相有差别，比如PH不同之类

作者: dragon5 时间: 2010-7-27 17:57

首先保证流动相配的没问题，最好现用现配，另外把柱子用甲醇好好冲下再走一针试试因为你是新柱子

作者: dxkuii 时间: 2010-7-27 17:57

再配个新的流动相，多走一走，再试一试。。。

作者: yyid 时间: 2010-7-27 17:57

你换了柱子吗柱压和以前一样吗？

作者: 358uwcj 时间: 2010-7-27 17:58

朋友才换了柱子要多试几次吧，然后确定你以前的方法重现性好不~

作者: zxlyid 时间: 2010-7-27 20:03 标题: 回复 #1 lijing1403@163. 的帖子

柱压正常么？流动相配置有没有问题？可以考虑重新配置新的流动相试试。如果不行，考虑流速是否正常。或者仪器的流速阀是不是出问题？

对出峰时间影响最大的是流速，可以考虑在其他仪器上做做试下。如果正常，证明安捷伦的流速阀出问题了或者是比例阀出问题。

作者: sacred 时间: 2010-7-27 20:09

你的流动相的配置和以前一样吗，柱子用前处理了没，

作者: HEC_css 时间: 2010-7-27 20:09

QUOTE:

原帖由 lijing1403@163. 于 2010-7-26 21:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我使用的是安捷伦1200液相色谱平常我们用的是甲醇：流动相=6：94 苯甲酸山梨酸糖精钠出峰时间正常大约13分钟走完但是今天做时突然就提前出峰 5分钟就走完糖精钠跑到最前面去了峰形还好因为柱子才换了没多久所以 ...

看看流动相有没有配错

仪器是四元比例阀的话可能是比例阀坏了

作者: lijing1403@163. 时间: 2010-7-27 20:51

谢谢各位的意见我今天把柱子放在另一台仪器上是正常的所以是昨天那台仪器其中一个通道堵了今天用异丙醇冲了一下午已经好了

作者: JJSIE--NNE 时间: 2010-7-27 21:56

可能流动相比例变了，比例阀有问题不？

作者: hplcangel 时间: 2010-7-27 21:57

你的流动相有问题。好像不只是甲醇和水吧？

作者: DragonsABC 时间: 2010-7-27 21:57

换亲水柱吧，好做很多

所谓的AQ柱或者说水货的RP C18柱子

作者: 出国吧 时间: 2010-7-27 21:58

保留时间波动有很多种原因的，你可以看看那你的流动相的组分有无变化，再来你的柱子是新的，要用甲醇多冲冲，注意色谱柱没有平衡好的话也会造成保留时间的波动的。。。

作者: renminliu 时间: 2010-7-28 09:04

你的流动相变了，与原来不同！

作者: belightchen 时间: 2010-7-28 09:30

如果柱本身没问题，这个问题可能是pH值变化引或流动相梯度变化引起的。建议用60%甲醇冲洗柱子，脱除可能的污染，然后用重新配置的流动相重新分析，注意柱箱温度。如果还是提前了，说明柱子的ODS层脱落太多，需要更换新柱子。供参考。

作者: chebaoquan 时间: 2010-7-28 09:39

我分析是头一天用纯水冲洗了色谱柱，C18链发生了疏水闭合，色谱柱几乎丧失了保留行为，而重新试验时平衡时间不够，C18链未完全打开。
此种情况，用甲醇-水（甲醇比例70以上）冲洗2-3个小时即可恢复。但须注意，冲洗反相柱有机相比例需大于5%，通常用5-10%，可达到很好的效果。

作者: ljxuan 时间: 2010-7-28 09:46

应该是平衡没有做好，流动相甲醇比例较低，这种情况平衡不彻底，吸附力就会有变化。

作者: yfdihdx 时间: 2010-7-28 09:52

流动相极性变了

看流动相比例是否正常

作者: wanghongtao 时间: 2010-7-28 09:54

关于液相出峰提前一般来说跟柱效降低和环境温度有关，可以进一步验证。

作者: lucy7791cd 时间: 2010-7-28 10:08

一般泵压及流速的改变不会影响出峰顺序，既然保留时间大大提前的同时出峰顺序发生改变，估计是与固定相、流动相组成、温度等变化有关。可以按相关方法分别检查后再分析看有无改善。

作者: peizg 时间: 2010-7-28 10:13

很可能是流动相的pH或配比问题。建议重新配一个试试！

作者: yh2201 时间: 2010-7-28 10:22

柱子引起这一现象的可能性较小，可能是流动相比例的改变造成的极性溶剂比例增大，色谱峰提前，建议检查高压泵以及各个通道是否吸液正常，重点检查比例阀和密封圈。

作者: cxbml 时间: 2010-7-28 11:02

出峰时间和流动相的比例、柱子、温度等都有关系。你的出峰时间可能与气温有关，化合物出峰次序和柱子有关。

作者: chenxj 时间: 2010-7-28 11:10

影响色谱峰保留时间的因素很多，主要有色谱柱的型号、长短、柱温，流动相的比例、pH值等。根据网友提供的信息，希望他（她）在新色谱柱型号、柱温与过去一致的前提下，重点检查一下流动相中甲醇和水相配比的影响。因为所使用的流动相中甲醇仅占6%，有机相和水相悬殊太大，这种情况下甲醇量的稍微增加就会引起色谱峰保留时间的明显提前。建议重新配制流动相再试，有望能解决问题。

作者: chengxl 时间: 2010-7-28 11:29

若色谱柱一直是反相，没有改正相，你的色谱峰提前，是不是你的流动相改变PH值了，影响的这三个化合物的电离。

作者: whlin 时间: 2010-7-28 11:32

1)柱型是否不同,即使相同柱子,不同时间填柱,填料活度不同,
2)不同时间配制溶剂如甲醇的含水量不同,
3)柱压或流速问题,
4)水的硬度问题

作者: liuping050 时间: 2010-7-28 11:48

1、可能你的样品可能发生了变化。样品稳定性不够好的话会出现这样的问题。
2、如果不考虑样品变质的话，柱温变化可能性很大。
3、流动相用缓冲液时，如果走完样品后未把柱子冲洗干净，保留时间会提前。
4、建议：把柱子用异丙醇冲洗一下试，冲柱子用过低的有机相比例会导致烷基链卷曲，再用的时候会使保留时间减短，然后用高有机相比例冲洗一段时间可恢复。

作者: jiangxn 时间: 2010-7-28 11:53

检查柱子和流动相:（1）柱子是否和以前的完全一样；（2）流动相配比是否完全一样...

作者: mayueming 时间: 2010-7-28 11:56

出峰提前的原因可能是(1)更换柱子;(2)流动相中有机相有变动或比例有变动;(3)柱温有所升高.

作者: grc7636 时间: 2010-7-28 11:59

可能存在以下原因
  1 流动相组成发生改变，甲醇比例增加；但此种情况不会改变待测物出峰顺序；
  2 流动相pH发生改变，增加或降低，可改变待测物出峰顺序；
  3 待测组分标准溶液发生改变，如酸性条件下（苯甲酸、山梨酸）使糖精钠化学性质发生改变，导致出峰顺序发生变化。如果标准溶液为混合液，则更有可能。
此外，是如何判断糖精钠出峰提前的，通过与标准品比较保留时间，还是采用质谱检测器根据分子量信息？如果都不是，则难以判断“跑前面去的峰”是否是糖精钠。
以上只是推断，仅供参考。

作者: zhangguo4345 时间: 2010-7-28 12:03

首先看看你的流动相配制有没有错误，正常情况下峰的位置是不会发生改变的，前提条件是没有换色谱柱，流动相比例改变了也会造成色谱峰位置的交换，另外看你是不是你的流动相分成几个通道走，如果是的话看比例阀是不是出现了问题，我在做的过程中也遇到色谱峰提前的情况，原因就是无机相那个通道被堵住了。还有就是安捷伦溶剂瓶你不要封得太严。

作者: luxx 时间: 2010-7-28 12:07

依据我的经验,首先我想到的是流动相是否出差错才导致糖精钠跑到最前面去了。另外,温度等外界环境也会导致出峰时间的不正常,出峰时间提前也可理解。
如在核对流动相和样品准确无误的情况下,才考虑柱子是否有问题,检验的方法与说明书一致。

作者: yanglb66 时间: 2010-7-28 12:14

可能的原因是：
1 流动相的配比是否正确，重新配制一下，再做一次看看
2 另外换一根同类型的柱子重新作，试试看
3 柱温是否正常

作者: junzhang654321 时间: 2010-7-28 13:25

安捷伦1200为四元泵，如果是用四元泵自动混合流动相，水相的不锈钢滤头易生细菌，从而堵塞，使实际流动相中甲醇比例增高，从而导致出峰提前。
另外你写道“我们用的是甲醇：流动相=6：94”，到底是什么流动相呢？如果不是上述原因的话，就要从流动相中找原因了。

作者: liuyongsuo 时间: 2010-7-28 13:29

色谱保留时间提前一般有三个原因：流动相配比改变、色谱柱固定相流失、样品本身问题。
流动相没有写明是否调pH值，如果只有糖精钠的保留时间提前，而另外两种物质的保留时间变化不大，估计是样品本身的问题。你所用的流动相中有机相比例很低，而糖精钠为水溶性钠盐，pH对保留时间影响比较大。

作者: sunny712712 时间: 2010-7-28 13:35

检查一下你的流动相

作者: 健康千万家 时间: 2010-7-28 13:54

那么早就出完了，对食品添加剂的分析来说是没有什么用的，

主要怀疑2点

1.你的柱子平衡时间够不？因为刚开始柱子里面甲醇的含量比例比较高，如果平衡时间不够的话，提前出峰是正常的，多平衡一阵子就好了

2.如果你平衡了很久还是这么早就出峰，那么就要考虑流动相的问题了，如果是预先混合的，那么你的比例正确吗？如果是在线混合的，检查下进水的泵，看是不是有问题.

作者: yinge 时间: 2010-7-28 13:54

要么流动相配错了要么柱子没平衡好

作者: fqdfi32 时间: 2010-7-28 13:54

检查检查水相的滤头和单向阀

作者: gshaojun0823gs 时间: 2010-7-28 13:55

保留时间稳定吗？要是不稳定可能是比例阀出问题了

作者: lxf2010 时间: 2010-7-28 14:01

朋友，你说新换了柱子，反相柱的类型对吧？你的样品是新制备的还是原来的，建议你测一组以前样品的数据，比较一下！

作者: xiaoxy 时间: 2010-7-28 15:17

如果仪器柱子没变，那你一定是重新配流动相了吧？是不是把甲醇：水=6：94，搞反了？极性完全相反，出峰顺序正好相反。

作者: yingsun2007 时间: 2010-7-28 17:13

峰形好说明色谱柱没有问题，保留时间提前及出峰时间变化，可能的原因应该在流动相方面，我觉得应该看看下面两方面：
1、出峰时间提前，首先看流速是不是变化了，比如以前是1.0 mL/min，现在是0.6mL/min，不过因为糖精钠提前了，说明三种化合物的保留行为变化了，流速不会影响出峰的先后顺序，可能性较小，稍微留意一下就可以了。
2、最可能的就是流动相的组成变化了，色谱保留行为主要是色谱柱和流动相影响的，若色谱柱没变，应该是流动相变化了。我记得防腐剂的流动相是乙酸铵水溶液，乙酸铵起点离子对试剂和pH缓冲的作用，有助于苯甲酸、山梨酸、糖精钠在色谱柱的保留，即延长保留时间。若他们出峰时间提前了可能是乙酸铵没有加，或者乙酸铵的浓度变化了，也有可能是溶液的pH变化了。
如若上面的流动相条件没有变化，就该是色谱柱的问题，若是新柱子，看看色谱柱的型号、类型是不是和以前用的一样，不同厂家以及同一厂家不同型号的色谱柱对化合物的保留相差很大。若只能用这个柱子，建议改变流动相组成，把甲醇的比例改小，比如改为5:95或4:96。

作者: lypgz 时间: 2010-7-29 08:17

主要应检查流动相批次或来源，确认流动相的组分、纯度无误．．．

作者: tangxp 时间: 2010-7-29 10:19

没写清楚流动相是什么。如果其他条件没有变，有可能是配制的流动相发生了变化，比如配制时由于某些原因导致pH值与原来配制的pH值不同或者流动相放置时间过长。

作者: xgchu 时间: 2010-7-29 10:25

这种情况可能原因：
1、是否更换了流动相。不是说流动相比例没变就没问题，而是说是否上次的试剂用完又换了一瓶新的？
2、色谱柱是否又重新平衡了？
3、标准溶液重新配了吗？
4、标准液被弄混了吗？
5、如果上述都不是的话，还有可能是柱头上的杂质被洗脱掉，或是柱上的杂质被洗脱掉，柱流速加快导致出峰速度加快；
6、如果所有条件都不变，那么可能是标准液给弄混了；
7、还有可能就是柱子使用的时间太长了，柱效严重降低，出现这种异常现象；
8、可以换根柱子试一试，保留时间是否还是原来的值，再重新配置新的标准液；

“不怕不会做，就怕比着做”hoho

作者: guozhimou 时间: 2010-7-29 10:28

可能的原因：
1. 柱子没有完全平衡好，有机相含量还比较高，导致保留时间提前，建议平衡时间长一点再试试。
2. 由于使用的流动相含水量较高（94%），导致C18固定相发生“疏水塌陷”，保留时间会大大提前，建议使用大量甲醇冲洗柱子以恢复C18的正常构象，然后再平衡到所需流动相条件试试保留时间是否重复；使用高含水量流动相分离极性物质最好使用极性C18固定相。
3. 色谱泵出现问题，导致水相含量偏低。

作者: luojw31 时间: 2010-7-29 15:32

我认为可能原因有：1、液相色谱仪比例阀出现问题，导致混合比例不准，可能有机相比例大于实际设定值，从而使出峰时间提前；2、检查柱压是否有明显变化，以判断色谱柱是否发生固定相流失等损坏情况，如是，则可更换同品牌新色谱柱试试。

作者: xjp_731205 时间: 2010-8-2 11:00

1、先检查流动相流速和配比的问题，看流动相的配置是否有问题。
2、检查流动相的质量问题。
3、检查新换的柱子，若果原来原来用的是反相柱，而现在用了正相柱，出峰时间会大大不同，出峰顺序则可能会相反。

作者: fan_guoliang 时间: 2010-8-2 15:03

从色谱理论基础看网友的问题一定是出现在流动相的组成或色谱柱发生了变化造成的。因为色谱柱是刚刚换过的，所以首先应考虑是否已经完全被流动相平衡了，解决此问题只要长时间平衡一下多走走空白流动相即可。另外从网友使用的流动相组成看是6:94（不知道94是什么？），这里甲醇的百分之六的微小变化都会造成流动相组成的巨大改变（必须用相对比值考虑问题）。最后一种原因是网友的进样量如果被意外超量也会出现这种现象。

作者: sunzw673 时间: 2010-8-2 15:08

液相色谱出峰时间提前原因较多，他出现问题的原因可能为色谱柱没有活化、平衡好。

作者: scnuzorro 时间: 2010-8-9 09:11

1、有可能是因为上次用完后没有按柱保护要求清洗并保存在适当的溶剂中，致使柱已部分损坏。
2、洗脱液组成没有重现

作者: shendongkj 时间: 2013-6-27 13:46 标题: 回复 #1 lijing1403@163. 的帖子

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