标题:
【求助】SDS-PAGE小分子条带不见了
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作者:
babybabe
时间:
2014-1-19 13:25
标题:
【求助】SDS-PAGE小分子条带不见了
如图12%的分离胶,4%浓缩胶。marker本应该有7条,最小的是18.4和14.4KD(失踪的就是这两个大小的带,样品中小于这个值的蛋白也看不见)。可是每次都只能看到5条。图中最下面一条线是溴酚蓝的位置,没有跑出去。
请问是什么原因?
图片附件:
80071712.jpg
(2014-1-19 13:25, 29.31 KB) / 该附件被下载次数 8
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=22786
作者:
babybabe
时间:
2014-1-19 13:26
这是我的电泳图
图片附件:
17446563.jpg
(2014-1-19 13:26, 42.81 KB) / 该附件被下载次数 12
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=22787
作者:
hustwb
时间:
2014-1-19 13:26
会不会已经跑出胶了,你可以尝试让溴酚蓝只跑到3/4胶面处就停止电泳,然后看看能否看到
作者:
cocacola
时间:
2014-1-19 13:27
从图上看显然小分子蛋白被压到了和溴酚蓝前沿相同的位置,如果没有跑出去的话就是胶浓度不对,建议更换试剂
作者:
9900
时间:
2014-1-19 13:27
QUOTE:
原帖由
cocacola
于 2014-1-19 13:27 发表
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从图上看显然小分子蛋白被压到了和溴酚蓝前沿相同的位置,如果没有跑出去的话就是胶浓度不对,建议更换试剂
同意。是胶的浓度不对了。检查一下丙烯酰胺的配制,干脆配点新的。
作者:
sunnyB
时间:
2014-1-19 13:27
单一浓度的胶的分辨率不高,特别是对小分子量的蛋白,梯度胶的分辨率就可以提升,建议用4-20%梯度胶试试。
作者:
131415
时间:
2014-1-19 13:28
15%分离胶试一下吧!
我也用的是fermentas的这个marker!
作者:
veiwu
时间:
2014-1-19 13:28
我的SDS-PAGE出现奇怪的问题,电泳跑好后大的东西都集中在两层胶的分界处往分离胶下一点,下不来。而下来的东西又是模模糊糊,条带不清晰。出现问题是在我原有的30%丙稀酰胺液用完后,新配制的一批溶液后,后来把所有的溶液都换掉了,都无法解决问题。
作者:
ROSE李
时间:
2014-1-19 13:29
换用15%的分离胶
作者:
koook5695
时间:
2014-1-19 13:29
跑出去了~~
作者:
coolcool
时间:
2014-1-19 13:30
话说……
这家的marker我就没看到过小分子亮的那两个带
作者:
15902739275
时间:
2019-8-21 16:11
请问解决了吗?我最近也是遇到这个问题,marke25KD以下的两条带和小于这两条带的蛋白都不清晰,看不清楚。
作者:
chenzhen2016
时间:
2023-8-10 11:04
由于我无法看到你提到的图像,我将根据你的描述尝试为你解释可能导致小分子条带在SDS-PAGE中消失的一些常见原因:
1. 样品准备: 小分子蛋白在SDS-PAGE中容易受到样品准备的影响。如果样品准备不当,可能会导致小分子蛋白无法进入凝胶或难以分离。
2. 凝胶浓度和聚丙烯酰胺浓度: 小分子蛋白在高浓度聚丙烯酰胺凝胶中容易迁移过快,使得它们可能在凝胶底部扩散而看不到。你可以尝试使用更低浓度的聚丙烯酰胺凝胶来解决这个问题。
3. 电泳条件: 电泳条件的设置也可能影响小分子蛋白的迁移。你可以尝试减缓电泳的电流或延长电泳时间,以便小分子蛋白有足够的时间迁移到凝胶上。
4. 缓冲液pH: 缓冲液的pH也会影响蛋白的电荷状态,从而影响它们在凝胶中的迁移。确保使用正确的pH条件。
5. 样品加载量: 小分子蛋白的加载量也可能影响它们在凝胶中的显示。过多的样品可能导致条带过于密集,使得小分子蛋白无法清楚地显示出来。
6. 蛋白结构: 有些小分子蛋白的结构可能导致它们不容易与SDS结合,从而影响它们在SDS-PAGE中的迁移。
如果你已经排除了上述因素,并且问题仍然存在,可能需要进一步详细的实验和分析,以确定造成小分子条带消失的确切原因。你还可以考虑咨询在SDS-PAGE技术方面有经验的同行或专家,以获取更具体的指导和建议。
作者:
chenzhen2016
时间:
2023-8-18 16:11
SDS-PAGE凝胶中出现带子缺失的情况可能是由于多种因素引起的。以下是可能导致你描述的问题的一些原因和解决方法:
1. 样品加载量不足:如果加载的样品量过少,特别是对于低分子量蛋白,它们可能不会形成明显的带子。确保你加载足够的样品量,尤其是对于低分子量的目标蛋白。
2. 电泳时间不足:低分子量的蛋白可能需要较长的时间来跑出。尝试延长电泳的时间,以确保低分子量带子能够迁移出胶。
3. 电泳电流不足:如果电流设置得太低,可能会导致蛋白质在胶中迁移不足,特别是对于低分子量蛋白。确保使用适当的电流条件。
4. 胶的制备问题:如果凝胶制备过程中有问题,比如凝胶聚合不均匀、凝胶老化等,可能会导致带子缺失。确保你的凝胶制备过程是正确的。
5. 电泳缓冲液问题:电泳缓冲液的pH和离子浓度对电泳效果有影响。确保使用正确的缓冲液,并检查是否存在pH偏移或离子浓度异常。
6. 电泳系统问题:电泳系统本身可能存在问题,比如电极不均匀、电泳槽电流分布不均等。确保你的电泳系统正常运行。
7. 蛋白质结构问题:某些蛋白质可能由于其自身的特性而在SDS-PAGE条件下迁移异常,导致带子不明显。这种情况可能需要进行其他分析确认。
8. 试剂问题:尝试检查使用的试剂是否正确,例如样品缓冲液是否与凝胶电泳缓冲液相兼容。
综合考虑以上因素,你可以逐一排除问题,并进行一些小规模试验来找到问题的根本原因。如果问题持续存在,可能需要进一步的实验优化和仪器检查。
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