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标题: 【求助】】水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上... [打印本页]

作者: nvdabing 时间: 2014-2-8 22:36 标题: 【求助】】水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上...

水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上还是室温条件下？就是有关再次复性的问题。请赐教，多谢了

作者: bling 时间: 2014-2-8 22:37

你是指的上样前吧？我们一般是水浴变形之后在室温下平衡5 min左右，然后离心，再上样电泳。至于放在4度，应该也是没有问题的。但我看的几个大公司的WB操作指南都是放在室温下。

作者: douding66 时间: 2014-2-8 22:37

QUOTE:

原帖由 nvdabing 于 2014-2-8 22:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上还是室温条件下？就是有关再次复性的问题。请赐教，多谢了

放到室温下冷却就行，没有必要非要放到冰上。
蛋白用上样缓冲液煮沸变性，我觉得应该是个化学变化吧，所以应该不能够复性了。

作者: TAT 时间: 2014-2-8 22:38

应该是在室温下，如果在4度的样品则需要在室温下平衡一段时间，主要是让低温析出的sds溶解。

作者: birdfish 时间: 2014-2-8 22:38

楼上说的有道理。室温比较合适。

作者: greenbee 时间: 2014-2-8 22:39

室温如果样品保存在-20度一段时间后再上样理论上应该再煮沸1-2分钟再上样以防SDS析出

作者: dmg 时间: 2014-2-8 22:39

推荐放室温吧
至于煮沸前所有操作在冰上目的是防止目标蛋白被降解
煮沸后所有蛋白变性当然包括蛋白酶了
至于放冰上，低温很有可能导致SDS析出。。。

作者: nvdabing 时间: 2014-2-8 22:39

多谢各位的热心帮助了。今天我上样前还是放置在冰上了，不知道SDS析出是什么表现？因为今天跑电泳时出现了2个异常现象，1.就是溴酚蓝跑到最下面时颜色变红了，2.还有就是跑完第一阶段电泳后，发现电泳带拉的很长，不是像以前那样电泳带压的很扁平成一条直线。SDS析出会影响与蛋白质充分接触吧？这样的话蛋白就不好转到膜上了吗

作者: sunnyB 时间: 2014-2-8 22:40

sds析出会有什莫样的影响啊影响蛋白峰度？不明白

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