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标题: 【求助】为什么跑的二维胶上一个点都没有？ [打印本页]

作者: vivian4123 时间: 2014-2-10 17:18 标题: 【求助】为什么跑的二维胶上一个点都没有？

刚跑了块胶，上面一个点都没有，排除忘了加样品的可能，各位高手认为还有什么原因会导致这个现象？万分感谢！！！

作者: taoshengyijiu 时间: 2014-2-10 17:19

提取的样品质量好不好？我觉得主要是这个原因，以前我们也出不来点，后来改进方法点就一个个都出来了

作者: vivian4123 时间: 2014-2-10 17:20

样品的问题会导致一个点都没有吗？胶面非常干净，什么都没有啊！
能请教下你们做的是什么材料吗？样品提取方法是怎么样的？谢谢啊！

作者: 7437654 时间: 2014-2-10 17:21

我做的是水稻，不知道你的是什么？可能我的好做点？

作者: vivian4123 时间: 2014-2-10 17:21

我做的是动物组织的，动植物组织可能差别还是比较大的吧。

作者: panda王 时间: 2014-2-10 17:21

提取方法之前有一些相关讨论，可以检索看看

作者: 小游abc 时间: 2014-2-10 17:22

做双向前先跑个SDS-PAGE，检测下蛋白丰度。另外，足够的上样量也至关重要

作者: fox_79 时间: 2014-2-10 17:22

我也是啊，胶面非常干净，连背景色和蛋白质条带都没有，不知道楼主的问题解决没有呢，我的样本是体液，上样量400微克，PH4-7，18厘米胶条，另外“做双向前跑个SDS-PAGE是什么意思？？？
怎么跑呢？

作者: c86v 时间: 2014-2-10 17:24

就是先跑一个1D-SDS-PAGE，再染色看看，这样就可以知道你的样品是否有问题，上样量对不对。这应该做为跑2D的一个标准程序。

作者: fox_79 时间: 2014-2-10 17:25

楼上的意思是不是可以先单独跑个二向，跑个MAKER呢？不好意思，不懂1D-SDS-PAGE的意思？

作者: flower-201 时间: 2014-2-10 17:25

1D-SDS-PAGE就是直接做个第二向SDS-PAGE

作者: fox_79 时间: 2014-2-10 17:25

那直接做二向的蛋白怎么放啊，从哪里来？

作者: gogo 时间: 2014-2-10 17:26

是银染?可能是你染色方法的问题。
要是显色做不好，可能出现这种问题。。。

作者: lixi559 时间: 2014-2-10 17:26

楼主，直接把你用来做二向的蛋白加上样缓冲液拿来做一向，也有可能是染色问题啦，不然就算样品提取不好，也不至于一个点也没有啊

作者: xiaoxiaoniao 时间: 2014-2-10 17:26

检查下电泳液的浓度，我有次不小心把浓度稀释了一倍胶上几乎就没有点。

作者: DNA 时间: 2014-2-10 17:27

我也出现个一个点也没有的情况，当时用的是别人的蛋白质用来练手，没有做蛋白质定量就直接取20ul样品，跑2-D，做银染，做完之后一个点也没有，一问才知道他的蛋白质浓度只有0.3ug/ul，呵呵。。建议你做蛋白质定量

作者: 大尾巴 时间: 2014-2-10 17:27

是上样量不够吧

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