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标题: 【求助】超声提取时产生大量的白色泡沫,是何原因？ [打印本页]

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:16 标题: 【求助】超声提取时产生大量的白色泡沫,是何原因？

超声提取时产生大量的白色泡沫,是何原因？

作者: 小糖块 时间: 2014-3-3 15:16

应该是蛋白吧,有蛋白的溶液一震动就会产生白色气泡.

作者: sunnyB 时间: 2014-3-3 15:17

是不是温度也有点高啊？超声要在冰浴下，应该会好些

作者: 白白的 时间: 2014-3-3 15:17

不知道你超生样品的体积多少?
如果探头伸入液面太浅,很容易产生泡沫的

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:17

我想可能是楼上说的情况。
我提的是蛋白，1ml。以前没有发生这种情况
我超声的时候，产生的气泡多的很，看起来像冰淇淋，呵呵

作者: huifeng0516 时间: 2014-3-3 15:18

1.检查探头的位置是否准确；如站友所说，我们用的大的，液面要在1-1.5cm之间，探头位置在容器中间，离容器壁的距离也要适中！
2.现在气温高冰浴或许也不构，如果你超声时间长的化周围的冰就融化了，温度依然会很高，在冰里加水，冰水混合物温度一直是0度，就OK。
3.超声条件，可以将间隔时间延长，这样产热会小些。
你的情况蛋白都发生变性了！

作者: 3N4G 时间: 2014-3-3 15:18

超声裂解蛋白产生泡沫多半是因为蛋白变性了，可能的原因有菌液浓度太高、超声功率太大、温度太高、探头没入液面太浅。可以分别针对这几个方面调整。我们做超声裂解时，一般菌体悬浮时加入10倍的裂解液，超声功率开到最小（大肠杆菌），冰水浴，探头一般在液面下0.5cm左右，基本上没有产生泡沫。

作者: 6327555 时间: 2014-3-3 15:18

像大脑、肺脏等组织是比较容易差生泡沫的！

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:19

我还像知道，产生泡沫后的蛋白质继续做双向电泳，会对结果有什么影响？谢谢！！！

作者: gogo 时间: 2014-3-3 15:19

你的裂解液是什末成分的？如果里面含NP-40, 配置裂解液时就会产生泡沫。

作者: vivian4123 时间: 2014-3-3 15:20

超的是什么？
菌液的话，不该这样，功率肯定大了
如果是组织样本，应该想用“绞肉机”彻底打碎样本，或者做死的研磨，然后超声。

作者: TAT 时间: 2014-3-3 15:20

NP-40是不是去糖基化的物质？它是起泡剂啊？把它放在裂解液里一起超声是不是可以顺便去除糖基？

作者: changlhsyo 时间: 2014-3-3 15:20

超蛋白的时候产生大量泡沫是因为打空了，那样就等于没有超声好
应该将超声头完全侵入蛋白裂解液里，就不会出现充分

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:21

今天测了一下浓度，才有100ug/ml
为什么会这么低呢。我用的是TCA丙酮法，用丙酮洗了一次，乙醇/乙醚＝1:1的洗了两次，然后加裂解液。加裂解液前沉淀很多，然后按照10mg加200ul裂解液加的，没想到浓度这么低。是因为产生气泡的原因吗？
另外我比较倒霉，冰箱坏掉了，等过完周末，箱内温度到了16度。大家分析分析是什么原因？
谢谢

作者: gmjghh 时间: 2014-3-3 15:21

请问楼上，Lysis是什么成分？

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:22 标题: 回复 #15 gmjghh 的帖子

尿素  7M
硫脲  2M
CHAPS  4%

作者: hold住 时间: 2014-3-3 15:22

CHAPS肯定会有泡沫产生，我之前也是用裂解液直接当超声缓冲液了，结果发现探头位置合适，温度也够低，还是会产生泡沫，后来直接用PBS加蛋白酶抑制剂超声，完了再加入裂解液各种成分，效果有改善。

作者: redbutterfly 时间: 2014-3-3 15:22

请问楼上，你先用的PBS，然后再加裂解液各成分，那PBS用不用去除啊？

作者: kuaizige 时间: 2014-3-3 15:23

不去除，没发现有什么影响

作者: cj_mondy 时间: 2014-3-3 15:23

不去除，没发现有什么影响

作者: gmjghh 时间: 2014-3-3 15:24

把功率调低一点，探头不要碰到试管壁，再跑跑看

作者: 00无名指00 时间: 2014-3-3 15:24

PBS是磷酸盐缓冲液

作者: superboy 时间: 2014-3-3 15:25

加消泡剂

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