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标题: 【求助】western blot 胶片一片黑 [打印本页]

作者: caihong 时间: 2014-3-5 11:02 标题: 【求助】western blot 胶片一片黑

请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急

作者: ritou1985 时间: 2014-3-5 11:14

QUOTE:

原帖由 caihong 于 2014-3-5 11:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急

是不是漏了

作者: remenb 时间: 2014-3-5 11:14

如果是很黑的话，曝光的可能性不能排除。

作者: caihong 时间: 2014-3-5 11:15

但是就仅仅膜的位置黑
其他还是原样

作者: remenb 时间: 2014-3-5 11:16

楼主还是说详细一点吧，比如曝光的步骤，过程中有无发现什么异常现象，比如整张膜都有荧光之类的。

作者: 49888 时间: 2014-3-5 11:16

缩短曝光时间

作者: 987789 时间: 2014-3-5 11:17

请教：我做了western blot 最后进行荧光反应，但是为何在胶片中膜的位置一片黑。谢谢。急

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可能原因：
1）抗体浓度过高
2）发光剂太多，没有空一空
3）曝光时间太长
GOOD LUCK

作者: caihong 时间: 2014-3-5 11:18

缩短曝光时间

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先是反应时间为一分钟
而后再显影液中半分钟定影液中一分钟
最后用水冲洗

作者: caihong 时间: 2014-3-5 11:18

对了有个疑问，这次做得和过去的不一样
ECL 底片反应液洗膜后颜色有点发黄，很是郁闷那

作者: caihong 时间: 2014-3-5 11:19

QUOTE:

原帖由 remenb 于 2014-3-5 11:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
楼主还是说详细一点吧，比如曝光的步骤，过程中有无发现什么异常现象，比如整张膜都有荧光之类的。

对了有个疑问，这次做得和过去的不一样

作者: abc816 时间: 2014-3-5 11:19

光怎么样？肉眼看有光，是条带的还是一片光的？

作者: wood533 时间: 2014-3-5 11:21

建议把膜重新封闭再显影一次

作者: 8princess8 时间: 2014-3-5 11:21

1.封闭的不够
2.抗体浓度太高
3.TBST洗膜没洗干净
4.曝光时间太长
5.胶片不小心曝光了
6.显影液有问题
原因一个一个去排除吧！

作者: DONT 时间: 2014-3-5 11:22

显影后在双蒸水里涮一下，再定影。
试一下。

作者: pengke1983 时间: 2014-3-5 11:22

我之前的曝光时间是1min，怎么调整抗体浓度都不出结果，就跟你的一样，后来把曝光时间调整为1sec才出的结果

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