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标题: 关于检测核苷酸的难题~~(急件！！) [打印本页]

作者: yosingle 时间: 2010-8-17 19:05 标题: 关于检测核苷酸的难题~~(急件！！)

各位大侠，高手，近期俺要设计一个实验，但经过4、5天反复思考和查资料都没有找到太好的方案，遂进来赐教！
是这样的，有一个混合样品，已知里面含有蛋白质（少量）、多肽和游离氨基酸（占绝大部分≥50%）、核苷酸（可能有三种存在形式：核苷、核苷酸、碱基）、还有其他可溶性化合物质。
要求：检测样品当中核苷酸的含量。
疑难：由于样品中多肽和游离氨基酸含量较多，遂不能用紫外分光光度计法测量（蛋白质和核苷酸的吸光峰值很相近，只有在蛋白质含量（包括蛋白质、多肽和游离氨基酸）较少的情况下用此法才准确）。
我的思路是，先把多肽和游离氨基酸与核苷酸分离开，然后再用紫外分光光度计法测量核苷酸含量。但本人才疏学浅，不知用什么方法才能把两者分离开。请各位赐教~~

作者: eesa_dc_seein 时间: 2010-8-18 09:36

HPLC

很容易去做的，加油吧

作者: yosingle 时间: 2010-8-18 13:53

同学，很感谢你的指引，如果详细点就更好了~~~谢谢~~

作者: fancy077 时间: 2010-8-18 14:18

我最近也在愁肽类物质的提取，但苦于没有仪器。你说的蛋白质、多肽可能通过GPC分离掉，其它的我没有涉足，也无法提供帮助。

作者: yosingle 时间: 2010-8-18 18:26

呵呵~~谢谢你的建议~~
但是我们公司没有GPC呢~~只有一台HPLC~~
其实最好能有简单的理化试验就能将它们分开，不需要用到色谱等精密的仪器分析方法（因为这些东东好贵哇~~）

作者: Erica2088wr 时间: 2010-8-19 15:21

用色谱会不会简单点？

作者: njyyyil 时间: 2010-8-19 15:21 标题: 回复 #1 yosingle 的帖子

核苷酸总量是吧有专门的检测方法的定磷
先定磷再硫酸降解定总磷

作者: c4frank 时间: 2010-8-19 17:19

QUOTE:

原帖由 yosingle 于 2010-8-18 18:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
呵呵~~谢谢你的建议~~
但是我们公司没有GPC呢~~只有一台HPLC~~
其实最好能有简单的理化试验就能将它们分开，不需要用到色谱等精密的仪器分析方法（因为这些东东好贵哇~~） ...

定磷就是简单的理化实验只需要分光光度计，朋友常来论坛一起交流学习。

作者: yosingle 时间: 2010-8-20 19:57

定磷是不可能的啦~~因为磷的量和核苷酸的量不成比例~~这里的是核苷酸，而不是核酸~~是一大堆核酸水解后的残基，包括核苷酸、核苷、核糖、碱基~~

作者: 健康千万家 时间: 2010-8-28 11:41

把多肽氨基酸去掉可操作性不强，还是想办法用液相直接测你的目标物吧。

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