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标题: 【求助】是不是丽春红染不上色说明蛋白一定没转上膜 [打印本页]

作者: 白白的 时间: 2014-3-17 15:06 标题: 【求助】是不是丽春红染不上色说明蛋白一定没转上膜

今天又转了一次，依然是老问题，丽春红染仍然没有条带，marker转的很好。跑了两块胶，其中一块做了考马斯亮蓝染色，有很明显的条带。转过后的膜用干燥透视法（用20%的甲醇湿润后放在灯箱上观察有没有条带）发现有条带，但丽春红就是染不上色，不知道什么原因，请战友指点，谢谢了。
我考虑蛋白应该是转上去了，但为什么丽春红染不上色，丽春红染色不是挺敏感的吗。

作者: summerxx 时间: 2014-3-17 15:06 标题: 回复 #1 白白的的帖子

丽春红不敏感，灵敏度不如考染

作者: feima+ 时间: 2014-3-17 15:06

丽春红可以染胶吗？

作者: kuohao17 时间: 2014-3-17 15:07

怎么会这样,我染色都可以看见膜上有蛋白啊,是不是你染色时间短,你染多长时间.我一般染15到20分钟.

作者: bring 时间: 2014-3-17 15:13

你的丽春红染液配方是什么?

作者: 白白的 时间: 2014-3-17 15:14

我都染半个小时已上啊，我的丽春红是买公司的浓缩试剂，我买回来只要稀释就可以用了。做了3次了，都是这样的，还真不知道什么原因。

作者: fsdd817 时间: 2014-3-17 15:14

丽春红染色灵敏度是250ng
我试过200ng一般能看到
100ng基本上都看不到
你蛋白量少了肯定看不到的

作者: 白白的 时间: 2014-3-17 15:15

你讲的250ng，200ng是指什么的，是指加的上样量的总蛋白吗，我的上样量的总蛋白应该在300ng以上啊。还是说指的是每条条带的量，如果是的话，那该怎么计算？

作者: 831226 时间: 2014-3-17 15:16

当然是指每条条带的量了
比如说你拿BSA稀释后上100，200，500ng/lane作为对照，看看丽春红是否染上
对于你的目的蛋白，如果考染可以看到，就和marker比较一下，可以估算一下大概有多少量，好多公司的protein marker在标准上样量下，每条带大概有多少蛋白会标明的
比如biorad的有的marker，最细的条带大概有150ng

作者: 7437654 时间: 2014-3-17 15:17

丽春红不用染那么久，我一般滴一毫升滴到膜上，等5分钟用TBST冲掉染液就可以看见蛋白带了。

作者: fei1226com 时间: 2014-3-17 15:17

以我的经验,转膜后丽春红染不上色并不一定是没有蛋白.
如果转膜后膜比较干的话是很难被染上的.可以考虑PBST充分湿润后再染就可以染上了．
以前有好几次转膜后丽春红染色一点颜色也没有，我还是继续做，结果也能做出来，染后把暴光后的膜再用丽春红染就又可以染出色来．

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