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标题: 【求助】第二相跑了将近10个小时，晕乎！ [打印本页]

作者: kuaizige 时间: 2014-3-20 16:00 标题: 【求助】第二相跑了将近10个小时，晕乎！

有没有人碰到这种情况？
我用的是11cm胶条，ph3-10，
电泳设备Amersham Ettan DALTsix，一块胶
电泳缓冲液配置正确，6L，不调PH
程序：
S1 3W 45MIN
S2 20W 6Hr
S2 20W 3Hr 40MIN
本来以为S2 跑5小时足矣，没想到一直跑到今天凌晨。
各位大虾给分析一下，我是新手，第一次跑2D。
现在已经开始染色了，先回去睡一觉……

作者: 6327555 时间: 2014-3-20 16:00

首先考虑检查配胶用Tris-HCl缓冲液的Ph值

作者: 00无名指00 时间: 2014-3-20 16:00

10小时有点不正常了,现在结果出来了吗,电泳缓冲液不用调PH,配胶缓冲液PH8.8,一般一块胶的话时间可能长一点,但是也不会超过6个小时,哪里出问题了呢

作者: kuaizige 时间: 2014-3-20 16:01

Tris-HCl缓冲液的Ph值酸度计调过的，8.8没错。
跑出来的胶见下图,点不多，我估计跟上样量有关。
TO:zsp820620,谢谢师姐这些天来的指导：-）

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作者: utt0989 时间: 2014-3-20 16:02

Tris-HCl缓冲液的pH值偏低，我以前也遇到过这种情况。调过以后就好了。

作者: DNA 时间: 2014-3-20 16:02

首先要检查丙西酰胺胶中sds的浓度,因为sds带负电,sds量直接影响电泳速度
如果sds没问题,把电泳缓冲液更新了,尤其上槽液一定要是新配的
再没问题了,检查丙西酰胺胶中Tris-HCl缓冲液的pH值,要用精确ph计校准
都没问题,只有把丙西酰胺重配了
我最可怕一次17cm胶跑了20个小时,一晚上完全没睡- -!,后来发现是我们实验室的加样枪不准,缺了一半,sds加少了一半........
把sds配准后就基本没事了

作者: fsdd817 时间: 2014-3-20 16:06

跑完后电压是多少？如果很低的话，应该是上槽液漏了

作者: yes4 时间: 2014-3-20 16:10

跑完后电压是多少？如果很低的话，应该是上槽液漏了

作者: kuaizige 时间: 2014-3-20 16:11

电压约150V，不知道你说的上槽液是什么。
上周又跑了一块，调整了上样量，一样跑了9个多小时，电泳缓冲液没换，感谢bennyxiong的分析，下次再配置的时候我会留意。

作者: tuuu2 时间: 2014-3-20 16:11

我用的也是GE的ETTAN DALT SIX ,我现在二维电泳也要10小时,请问斑竹你现在有没有改进啊?

作者: yueban-1147 时间: 2014-3-20 16:22

我们实验室前一段时间也出现这种情况，结果换了电泳缓冲液中的SDS后，电泳就正常了。

作者: windy+++ 时间: 2014-3-20 16:23

我也遇到第二向跑的时间变长了，就换了Tris，可Tris 是调过PH的，
之前一般5个多小时，现在要7个小时，还没弄清楚是啥原因，费解。。。

作者: ending 时间: 2014-3-20 16:26

是GE的二向仪器吗？很可能是槽漏了

作者: tuuu2 时间: 2014-3-20 16:29

如果上述的可能都排除了话,可能是电泳槽的密封圈有问题,把s2 的功率加大试试!

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