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标题: 【求助】为什么背景这么深？ [打印本页]

作者: 30moonriver 时间: 2014-3-29 10:50 标题: 【求助】为什么背景这么深？

3月开始做wb,起初结果一直还好，条带清晰，背景淡，但是最近两次背景相当深，几乎掩盖条带，在暗室曝光的时候可以看到整张膜发白光，会是什么原因呢？请各路高手不吝赐教
实验条件和原来一样

作者: 了了 时间: 2014-3-29 10:50

我也有过这种现象，多洗会，觉得抗体是不是溶度高了

作者: 锤子 时间: 2014-3-29 10:51

QUOTE:

原帖由 30moonriver 于 2014-3-29 10:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
3月开始做wb,起初结果一直还好，条带清晰，背景淡，但是最近两次背景相当深，几乎掩盖条带，在暗室曝光的时候可以看到整张膜发白光，会是什么原因呢？请各路高手不吝赐教
实验条件和原来一样 ...

为什么是发白光呢。应该是发绿光啊。
把抗体的浓度降低。

作者: @STAR@ 时间: 2014-3-29 10:51

一抗是新鲜的，还是重复用的？

作者: 30moonriver 时间: 2014-3-29 10:51

一抗是新鲜的，以前即使是反复使用的一抗也能做出很好的结果
请问封闭和孵2抗的效果会受气温影响么

作者: @STAR@ 时间: 2014-3-29 10:53

是不是原来每次做一张膜，而现在同时做多张？

作者: 30moonriver 时间: 2014-3-29 10:54

我的实验材料试剂和方法和以前都是一样的呢
而且我们实验室的其他人也都出现了同样的情况

作者: 66+77 时间: 2014-3-29 10:54

我也出现过类似的情况。
建议更改膜。
最可能的就是膜发生了污染，可以启用另外一批。
然后就是滤纸。

作者: mod=8048 时间: 2014-3-29 10:54

我感觉是膜洗的不够干净

作者: 30moonriver 时间: 2014-3-29 10:55

二抗是按1：5000稀释的不过最近换了一支二抗（同一家公司）
会有影响么？
洗膜的次数和时间跟原来也是一样的呢

作者: 锤子 时间: 2014-3-29 10:55

那你用一张小膜封闭后孵二抗，显影看看有没背景。

作者: youyou99 时间: 2014-3-29 10:55

我以前也出现类似情况，背景非常深，连目的蛋白条带都要对着光看才看的清楚，当时用的国产伊利脱脂奶粉，5％浓度，封闭2小时；后来改用进口脱脂奶粉，是别人给我的，不知是什么牌子的，浓度为10％，封闭2小时，其他条件都未改变，结果背景非常干净，再未出现背景深的情况。祝好运！

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