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标题: 【求助】关于一抗孵育的方法 [打印本页]

作者: docsy 时间: 2014-4-1 16:23 标题: 【求助】关于一抗孵育的方法

想问下，一抗孵育一般都用什么方法好呢？
用平皿放摇床孵育效果好还是反贴法好？
还有就是用反贴法时要放摇床摇吗？

作者: remenb 时间: 2014-4-1 16:23

没做过反贴发,我用的是培养皿孵育,应该不用放在摇床上的,你时不时的用手摇摇就行了

作者: yonger 时间: 2014-4-1 16:23

告诉你一个巨省一抗的办法，找一个大小合适的自封袋，有你的膜的一半大小即可，把要孵育的膜，从中间剪开，背靠背的贴在一起，有抗原的一面向外，放入自封袋里（里边有事先稀释好的抗体），放在摇床里摇。这样一张十泳道的膜，最多只用5ml抗体稀释液就能搞定了，而且这个稀释夜用完，回收，反复使用三次一般没有问题的。

作者: yapuyapu 时间: 2014-4-1 16:24

反贴法一张整膜只用1ml，小膜200ul, ，不用摇。袋装张整膜用2－3ml，摇。

作者: redbutterfly 时间: 2014-4-1 16:24

嘻嘻五毫升还不是剧省吧，你那一个50毫升BD管，里面加上2－3毫升一抗，然后把你的膜卷卷让没有抗原的面贴壁然后放在摆床上就好了，岂不是更省。你要是自封袋我不知道要不要摇或是摇有没有摇的效果，那样封闭过夜还可以。
另一种才叫更省，剪一块稍稍比你的膜大一点的封口膜然后上面加上你得一抗，只需在中间加点即可，然后把你的膜扣在上面这样就会有吸力是你的膜和封口膜结合在一起接触的面均会有一抗，然后放在一个大玻璃平皿里就好了，估计你连一毫升都用不了，嘻嘻这可是我都做国的方法，绝对好用。

作者: docsy 时间: 2014-4-1 16:24

剪一块稍稍比你的膜大一点的封口膜然后上面加上你得一抗，只需在中间加点即可，然后把你的膜扣在上面这样就会有吸力是你的膜和封口膜结合在一起接触的面均会有一抗，然后放在一个大玻璃平皿里就好了
这就是反贴法吧？封口膜也可以用保鲜膜代替吗？要放摇床摇吗？

作者: 3N4G 时间: 2014-4-1 16:25

1ML一抗稀释液滴加在膜有蛋白的一面，然后迅速盖上保鲜膜，赶出气泡，室温静置1h就可以了（4度过夜也OK），缺点是一抗稀释液不能反复使用，是一次性的
你也可以按照1：2000稀释到10ml封闭液中摇1h，然后洗膜加二抗。一抗可以回收4度保存，可以反复使用，次数没具体算过，10次应该有了，特点是比较简单，也不算浪费，折合一次用1ml到2ml的一抗稀释液，缺点是稀释液容易变质，且一抗的效率在逐步降低，不够稳定。

作者: ffaa 时间: 2014-4-1 16:25

这叫反贴法吗，嘻嘻可能是我不知道专业术语，保鲜膜不好因为容易骤，不用放摇床

作者: wmp1234 时间: 2014-4-1 16:26

我把抗体孵育的塑料袋剪成膜的大小，热合机封三边，只需加入2-3ml抗体稀释液，放入膜，再将另一边热合机封口，放4度冰箱里过夜孵育就行，很省事

作者: tangxin_80 时间: 2014-4-1 16:26

我们使用培养皿抚育一抗的时候一般液就5ml

作者: 831226 时间: 2014-4-1 16:27

我用蜡皿很省抗体
蜡皿做法很简单，拿一个玻璃瓶皿，里面放一块蜡，加热，然后冷却就好了。
以后把要做的膜放在上面，因为有表面张力的作用，加的抗体都不会留到其他地方去，只要0.5-1ml就足够了，而且基本可以回收。
如果过夜的话记得把蜡皿再放入一个湿盒里，这样放冰箱就不会被蒸发了
但是我不知道这样和放摇床里摇有没有区别。

作者: zzzz 时间: 2014-4-1 16:27

我用一次性薄膜手套做封口袋，封口袋大小只要稍大于你的膜就够了，一次只用2ML稀释后的抗体液，很好用。
如果抗体在组织中表达低，可以考虑4度过夜，再拿出来室温摇床摇，封口袋可以直接放再摇床上，也可以放再培养皿中。

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