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标题: 用药物处理悬浮细胞，接种量50000/孔，处理时间24h [打印本页]

作者: ztj970831 时间: 2010-8-27 15:51 标题: 用药物处理悬浮细胞，接种量50000/孔，处理时间24h

用药物处理悬浮细胞，接种量50000/孔，处理时间24h。加入10uL MTT（5mg/mL），37度孵育4h，未处理组产生的甲瓒都很少，吸光度也很底，不知道问题出在哪儿，请教高手解答，非常感谢。

PS：细胞是新复苏不久的，铺板时的状态也不错。并且，有的时候，复孔之间差异很大，有的孔甲瓒多，而有的孔甲瓒却很少，没有染菌，接种量也基本一致。死活找不到原因啊！

作者: maomi530 时间: 2010-8-28 10:31

接种量太多，估计细胞长过了。根据细胞长的快慢，调整细胞数，估计你可以减少一半量；刚复苏的细胞最好稳定两三代后再用； MTT量可以增加至20ul。

作者: ztj970831 时间: 2010-8-28 10:33

接种量应该没过，50000接种培养一天的话显微镜观察并没有长满。而且之前有做过接种量25000、50000、100000的对照，发现甲瓒含量随接种量增加而提高，但个别孔的甲瓒会比较少。

作者: sacred 时间: 2010-8-28 10:39

MTT加入操作问题，很有可能。
因为10微升的加量很少，所以一般会不太注意，是否完全加入。
建议，吸取之后，10微升的枪头完全插入，完全吹出液体之后，在拿出枪头。

作者: 出国吧 时间: 2010-8-28 14:39

检测的时候没用DMSO溶么？
还有MTT是否失效，是否溶度配错，是否加入量较少

作者: 英语你我他 时间: 2010-8-28 14:43

貌似细胞密度过大，假如的Mtt量也偏少

作者: c4frank 时间: 2010-8-30 09:48

我用的是新买的碧云天MTT细胞增殖及细胞毒性试剂盒，MTT应该没有实效，加入的MTT是过量的。显微镜下观察，甲瓒的生成量都非常少，跟检测时溶解甲瓒的溶剂无关。

作者: ztj970831 时间: 2010-8-30 09:49

吸光度       0.01       0.031       0.835
吸光度       0.05       0.325       1.061
吸光度       0.013       0.077       0.11
接种密度       25000       50000       100000

以上是我做的不同细胞接种密度的吸光度比较，每个密度三个重复，培养时间为24小时。感觉各个重复间的差别都很大，并且我确定各个重复间接种的细胞数基本一致，没有染菌。一直找不到原因，很郁闷。

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