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标题: 【求助】WB一抗到底应该怎么回收？ [打印本页]

作者: sunnyB 时间: 2014-4-10 11:25 标题: 【求助】WB一抗到底应该怎么回收？

我上一次用TBST+奶粉（5%）稀释一抗。用毕，回收置于4度冰箱保存。中间隔了2天，今天我用拿出来用（稍微补了一些新鲜的），摇过夜后第2天发现，膜上沾满了奶粉的凝块。而用新配的奶粉5%稀释一抗就不会这样。
请问该怎样避免这种情况？我的一抗很宝贵啊，不回收也不行啊！

作者: ero11 时间: 2014-4-10 14:29

用TBS+BSA（1%~3%）稀释一抗，用后回收置于-20度冻存。再用时解冻适量补充新鲜的就行。
多多交流！

作者: sunnyB 时间: 2014-4-10 14:29

TBST可以吗
谢谢

作者: wmp1234 时间: 2014-4-10 14:29

我们实验室都是用TBST稀释一抗的
加不加奶粉视抗体的强度而定
但一般都是加1%的奶粉
回收次数也是视抗体而异
有的可以用5-6次呢
我自己都是新配的时候适量多配点
一直用到不能用为止
因为我觉得老是补充新鲜抗体挺浪费的

作者: sunnyB 时间: 2014-4-10 14:31

是加了奶粉的一抗在摇过夜的时候，奶粉都凝结成块了，昨天晚上又发生这种请情况了。我打算换成BSA，可能会好一点

作者: fsdd817 时间: 2014-4-10 14:31

大概奶粉质量不满意吧.
我们都是0.5%奶粉T-TBS配置的，加叠氮钠防腐，短期内没有问题

作者: huifeng0516 时间: 2014-4-10 14:32

放在-20度冰箱能用很久，牛奶也不会坏
BSA比牛奶好，更不容易坏

作者: remenb 时间: 2014-4-10 14:32

如果二抗是HRP标记的，用叠氮钠防腐就不合适。我们平时用的都是伊利的高钙脱脂奶粉，在4度冰箱中放24小时从来没有出现过凝结成块，所以你还是考虑奶粉质量问题。用BSA肯定好，但是成本太高，还是脱脂奶粉好用，经济又有效。
我们还从未回收抗体，所以其他地不清楚，不过看了上面的还是很有帮助，哪天经费不充足了就可以考虑回收再利用了。还是要谢谢。

作者: 66+77 时间: 2014-4-10 14:33

就染色结果看，个人认为脱脂奶粉的效果比较好，可是用奶粉稀释的话，不能长时保存，奶粉会干掉，夏天的话，超过三天还会发臭，所以如果在三天之内每天重复做，问题不是很大，如果需要一周，中间有一两天间隔，建议还是用1.5%BSA加叠氮钠

作者: xue258 时间: 2014-4-10 14:33

我用加了5％脱脂奶的TBST稀释抗体能用两天，4度冰箱保存～
没回收过～

作者: 喵咪 时间: 2014-4-10 14:34

杂完一抗后回收到密闭容器里 Eppendorf 管,封口袋都行
加叠氮钠防腐,4度保存,1月没问题
奶粉结块可能是污染所致,另外有时会有奶粉沉淀析出不影响使用取上清即可
回收次数不是很确定,看结果吧不过要是关键的结果或是样品处理周期比较长的话还是尽量使用新鲜抗体为了省点儿抗体耽误时间不值得
除非长时间不用否则不建议-20度保存反复冻融对抗体损伤挺大的

作者: sunnyB 时间: 2014-4-10 14:35

昨天看到有的教研室，只用TBST稀释抗体，回收也不加叠氮钠，爽就一个字！
奶粉老是有凝块，不知道是没摇开还是变质了，只好换了再说

作者: abc816 时间: 2014-4-10 14:35

我也是用TBST稀释抗体，没问题的。

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