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标题: 【求助】ELISA洗板后拍板的力度掌握 [打印本页]

作者: xue258 时间: 2014-4-14 16:37 标题: 【求助】ELISA洗板后拍板的力度掌握

我是新手，
现在用试剂盒做ELISA,OD值总是偏低,已经排除了环境以及试剂失效的可能了.有前辈说我拍板太重了,(每次都把手指拍出血泡了,因为没有洗板机T-T),包被会掉下来的,另一位前辈则要求我重重的拍啊~~~
请教到底这会不会影响实验结果啊?

作者: 3648755 时间: 2014-4-14 16:39

建议楼主做个对比试验，一组重重拍，另一组仅甩干( buffer加入以后手甩),看看有没有区别。

作者: huifeng0516 时间: 2014-4-14 16:39

我们拍的时候在板子下面垫上卫生纸，然后比较用力的拍，但是绝不会把手拍出血！个人认为拍重拍轻问题不大，拍的目的是把多余的液体拍出来就可以，至于蛋白会掉下来，那是不可能的，抗原抗体结合没有那么容易就分离的。

作者: ladyhuahua 时间: 2014-4-14 16:41

我是新手，
现在用试剂盒做ELISA,OD值总是偏低,已经排除了环境以及试剂失效的可能了.有前辈说我拍板太重了,(每次都把手指拍出血泡了,因为没有洗板机T-T),包被会掉下来的,另一位前辈则要求我重重的拍啊~~~
请教到底这会不会影响实验结果啊?
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拍板轻重不会影响显色值的，手工洗板一半浸泡时间不好控制可能对显色有所影响！

作者: yueban-1147 时间: 2014-4-14 16:43

OD值低与拍板没有什么关系，是不是你的试剂时间比较久了，效价下降了。我在实验中也遇到这样的情况，换新的试剂用，操作方法相同，OD就上去了。
试剂在有效期内依然会出现这种情况，延长显色时间看看。

作者: 8princess8 时间: 2014-4-14 16:43

拍板下面垫上纱布在用力拍几下,去除残余的液体即可,至于用力拍会使结合在板上的抗原和抗体脱落,我不赞成.建议从抗体,底物,酶等试剂着手找原因

作者: xue258 时间: 2014-4-14 16:43

我是新手，
现在用试剂盒做ELISA,OD值总是偏低,已经排除了环境以及试剂失效的可能了.有前辈说我拍板太重了,(每次都把手指拍出血泡了,因为没有洗板机T-T),包被会掉下来的,另一位前辈则要求我重重的拍啊~~~
请教到底这会不会影响实验结果啊?
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我刚做完，但不是重重的拍，而是甩干，效果挺好的。OD值偏低，我认为可以减少洗二抗的时间或次数，另一个增加显色时间。

作者: summerxx 时间: 2014-4-14 16:44

OD值偏低应该跟拍板儿关系不大：)影响的话，也就是影响孔间平行性什么的，一般就几折卫生纸平铺，上面拍拍就可以了，建议：
1。可以调整下一抗二抗的浓度；
2。检查下抗体或显色液是否失效

作者: 3648755 时间: 2014-4-14 16:44

建议楼主做个对比试验，一组重重拍，另一组仅甩干( buffer加入以后手甩),看看有没有区别。

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其实根据个人做ELISA次数不多的经验，两种方法没有差别。因为洗板机也就是喷入缓冲液，然后，晃荡几下，即吸出缓冲液。所以比较省力的手工方法是，将缓冲液灌入洗瓶中，反复冲洗，甩干，最后一次，在吸水纸上叩击，尽量清除残余缓冲液即可。

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