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标题: 【求助】一抗保存问题 [打印本页]

作者: utt0989 时间: 2014-4-15 22:08 标题: 【求助】一抗保存问题

新手请教:1.买来的抗体如何分装?
2.从以往的帖子得知,一抗稀释后保存需加防腐剂,我们实验室有二甲亚砜,它是用于防腐的吗?如果是,需要多大的浓度呀?

作者: DNA 时间: 2014-4-15 22:08

DMSO是助溶剂，好象不用于防腐，抗体防腐用叠氮钠，终浓度0.09%.

作者: 彼岸花opp 时间: 2014-4-15 22:08

一抗买来千万别全稀释，你啊用多少先稀释多少，剩下的接着按保存温度保存，另外吸一抗的枪头，存一抗的管子一定灭过菌再用，否则你的一抗可能就喂细菌了。

作者: utt0989 时间: 2014-4-15 22:09

还得灭菌呀!这我还真不知道,多谢指导,要不然结果就惨了Sad

作者: pengke1983 时间: 2014-4-15 22:09

一抗买来的分装问题应该在抗体说明书上标明了。我买的一抗就严禁分装，而我们隔壁实验室他们的抗体就是分装过的。这个要看说明书的。

作者: pengke1983 时间: 2014-4-15 22:11

请问你说的“另外吸一抗的枪头，存一抗的管子一定灭过菌再用，”是用高压灭菌还是紫外灭菌？

作者: 了了 时间: 2014-4-15 22:12

当然是高压灭菌了

作者: 伊莎贝拉 时间: 2014-4-15 22:12

没有那么严重的，只要4度保存好了就没事。每次取液都用新tip就行。抗体一般有效期就是1年，过期也没用了。

作者: u76mp 时间: 2014-4-15 22:14

MS我们实验室的枪头都是高压后再用的。
另外，叠氮钠终浓度只要0.02%就可以了。我一般是配成10%的浓度，然后用的时候每ml加2ul.

作者: utt0989 时间: 2014-4-15 22:14

叠氮钠用什么液体配的呀？它保存需要什么条件呀，有特殊要求吗？

作者: hold住 时间: 2014-4-15 22:15

一抗买来的分装问题应该在抗体说明书上标明了。我买的一抗就严禁分装，而我们隔壁实验室他们的抗体就是分装过的。这个要看说明书的。

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严禁分装是为什么？那不是每次用都要拿出来解冻一下？

作者: yayya 时间: 2014-4-15 22:15

说明书上这样写的，Do not aliquot the antibody.

作者: yayya 时间: 2014-4-15 22:17

抗体里面加的有甘油，这样可以保持抗体在-20度保存的时候仍然处于液态，所以每次取的时候可以直接取出，不用等抗体解冻。

作者: duoduo 时间: 2014-4-15 22:18

可以加入等体积80％甘油
在－20度下是不会结冰的也就不存在冻融问题
制备的抗血清也可以这样保存
有些商业抗体本身就是加有甘油的

作者: dreaming 时间: 2014-4-15 22:18

应根据说明书来进行保存
若说明书讲的不清楚
也可咨询抗体的销售或生产公司
应能得到更为具体的指导

作者: newway 时间: 2014-4-15 22:18

没有那么严重的，只要4度保存好了就没事。每次取液都用新tip就行。抗体一般有效期就是1年，过期也没用了。
我的个人经验.大部分的抗体能够应用3年,当然效价可能降低.

作者: xueyouzhang 时间: 2014-4-15 22:19

新买来的抗体可以先分装到0.5ml EP管中，这样就避免反复冻融。我们实验室很多种抗体稀释后放-20度，不需要加防腐剂的，可以反复用很多次，直到你认为信号不太灵敏，抗体个体差异很大，一般4，5次是没有问题的。我有一种抗体都用来20次了还很好用。我用来稀释抗体的管子是没有灭过菌的，没有那么严重会养菌。说明书上会很详细地告诉你稀释和保存方法的。

作者: milkdog 时间: 2014-4-15 22:20

是要根据说明书来操作的。我的一抗要求保存在4度，不纯在反复冻融的问题，就没有分装。如果是要求保存在-20度的，还是分装一下好。抗体是蛋白质，反复冻融当然不好。

作者: avi317 时间: 2014-4-15 22:21

很多要求4度保存的一抗都含有防腐剂，tips不需要灭菌。

作者: vivian4123 时间: 2014-4-15 22:21

装抗体的管子是特制的，所以不要随便分装。

作者: eric930 时间: 2014-4-15 22:22

一抗有必要加防腐剂，加硫柳汞也很好，也需要分装，一旦污染就不能用了

作者: 牛莎PC300抑菌剂 时间: 2021-9-26 17:44

可以使用牛莎PC-300抑菌剂，如果浓缩的方案，建议使用牛莎PC-950

作者: chenzhen2016 时间: 2023-7-17 16:33

1.分装抗体时，首先要确保分装过程在无菌条件下进行，以避免细菌污染。以下是一般的分装步骤：

准备干净的微量离心管或冻存管，并标记好抗体名称、批号和日期。
根据需要的浓度计算所需的抗体体积。注意，避免频繁冻融抗体，最好根据实验需求分装适量的抗体。
使用无菌的移液器和滤器尖端，将抗体从原瓶中吸取，并轻轻滴入预先准备好的离心管或冻存管中。
分装后，尽量迅速密封离心管或冻存管，并存放在适当的温度和条件下，如-20°C或-80°C。

2.二甲亚砜（Dimethyl Sulfoxide，DMSO）是一种常用的溶剂，在某些情况下也可用作防腐剂。但需要注意的是，对于抗体稀释液，一般不建议直接添加二甲亚砜作为防腐剂。

抗体的稀释液通常是一种含有蛋白质稳定剂（如牛血清蛋白、酪蛋白、明胶等）的缓冲液，用于稀释一抗和提供适当的浓度进行实验。这些稳定剂已经提供了一定的防腐功能。

如果你的实验需要长期保存一抗稀释液，可以考虑将其分装成小份，并在-20°C或更低的温度下存储，以延长其有效期。在分装过程中，确保使用无菌技术，并且避免频繁冻融。

总之，对于抗体稀释液，不建议直接加入二甲亚砜作为防腐剂。而是根据抗体稀释液的成分和使用要求，选择适当的稳定剂和储存条件来保持抗体的稳定性和活性。如果有具体的抗体保存要求，最好参考抗体供应商的建议或相关文献资料。

作者: chenzhen2016 时间: 2023-8-8 14:56

将买来的抗体进行分装时，需要遵循一些基本的操作规范，以确保其保存和使用的质量。以下是分装抗体的一些建议步骤：

1. 无菌条件下操作：在无菌条件下进行操作，以防止抗体被细菌或其他微生物污染。

2. 准备好所需器材：准备好无菌的移液管、离心管、吸头等器材，确保它们都是无菌的。

3. 样品分装：按照抗体供应商提供的信息，确定分装的体积和浓度。一般来说，你可以根据实验需要将抗体分装成小体积的储存管中，这样可以减少多次冻融对抗体质量的影响。

4. 避免多次冻融：多次冻融可能会降低抗体的活性。因此，将抗体分装成适合单次使用的分量，可以减少冻融的次数。

5. 标记清楚：每个分装的管子上都应该标明抗体的名称、浓度、分装日期和存放温度等信息，以便后续使用时能够准确识别和管理。

6. 储存温度：根据抗体供应商的建议，选择合适的储存温度。大多数抗体可以在-20摄氏度储存，但某些抗体可能需要更低的温度，如-80摄氏度。

7. 快速冷冻：在分装完毕后，尽量快速将抗体冷冻起来，以减少冻融过程对抗体质量的影响。可以考虑使用液氮或冷冻盒来加速冷冻过程。

8. 防止阳光照射：避免将抗体暴露在强光下，因为光照可能会降解抗体的质量。

9. 避免震动：储存抗体的冰箱或冷冻箱应该放置在不受过多震动的位置，以防止抗体的变性。

总之，分装抗体需要在无菌、清洁的条件下进行，同时要遵循抗体供应商的建议和实验室的操作规程，以确保抗体的质量和稳定性。如果有任何不确定的地方，建议咨询实验室的老师或有经验的同事。

二甲亚砜（DMSO，Dimethyl sulfoxide）可以用作一抗稀释后的防腐剂，以延长抗体的稳定性。它在一些情况下可以帮助防止抗体的降解和减少冻融的影响。然而，使用二甲亚砜需要注意一些因素：

1. 浓度选择：通常情况下，二甲亚砜可以在1-10%的浓度范围内加入稀释后的抗体溶液中。具体的浓度选择取决于抗体的性质、用途和供应商的建议。一般来说，可以从低浓度开始尝试，然后根据实验的结果逐渐调整浓度。

2. 注意稀释：如果要在抗体溶液中加入二甲亚砜，首先需要将抗体稀释到所需的浓度，然后再添加适量的二甲亚砜。不要在抗体还未稀释之前直接将二甲亚砜加入，以避免影响抗体的稀释计算和性能。

3. 实验验证：在开始正式实验之前，建议先进行小规模的实验验证，以确定加入二甲亚砜后抗体的稳定性是否有所改善，以及是否会影响实验结果。

4. 储存条件：一旦添加了二甲亚砜，抗体溶液应该储存在干燥、避光的环境中，可以在-20摄氏度或更低的温度下保存。

需要注意的是，尽管二甲亚砜可以在一些情况下有助于抗体的稳定性，但并不是所有抗体都适合添加二甲亚砜。有些抗体可能对二甲亚砜敏感，或者添加后会影响其活性。因此，在使用之前务必查阅抗体供应商的建议并进行实验验证。最好与实验室的老师或同事讨论，以确保正确地使用和添加二甲亚砜。

作者: chenzhen2016 时间: 2023-8-18 16:40

关于抗体的分装和保存，以下是一些常见的做法和注意事项：

1. 抗体的分装：当你购买大容量的抗体时，通常建议将其分装成小份，以免频繁开封造成的冻融循环影响抗体的稳定性。你可以将购买来的抗体根据实验需要分装成小的工作储存管，并储存在-20°C或更低的温度中。

2. 稀释后的一抗保存：通常，抗体的稀释液中会加入一些防腐剂来延长抗体的稳定性，避免细菌或霉菌的污染。对于常见的防腐剂，比如NaN3（0.02-0.05%），二甲亚砜（DMSO，5-10%），甘露醇（50-50%），你可以根据实验需要选择其中一种。但需要注意，有些防腐剂可能会影响抗体的特异性或其他性能，所以在选择防腐剂时要谨慎。DMSO通常用于储存一抗，但对于某些抗体，可能需要进行适当的稀释测试。

对于你提到的二甲亚砜（DMSO），它确实可以用作防腐剂。一般来说，5-10%的浓度可以考虑使用，但具体的浓度还需要根据你的实验室条件和实验需要进行调整。需要注意的是，DMSO可能会影响某些实验，比如细胞培养，所以在使用之前最好先进行适当的验证。

最终，选择合适的分装和保存方法，以及防腐剂的浓度，最好根据实验室的具体条件、抗体的稳定性信息以及你自己的实验需求来进行判断。

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