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标题: 有关物质方法验证（HPLC） [打印本页]

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-2 17:23 标题: 有关物质方法验证（HPLC）

最近在做原料药的有关物质方法验证，小弟是头一次搞这个东西，有很多问题都不大明白，特向各位老师请教。有些问题请不要见笑。。。。
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3)：甲醇：乙腈=90:6：4
柱子：C18
流速：0.8ml/min
检测波长：210nm
进样量：20ul
问题
1、在进行检测时，空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰（峰高大概是0.07mv，想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊）。不知道是什么原因，
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质（丙氨酸）出峰时间正好重叠，而且峰形不好，达不到注册要求的（对称性和分离度），但主峰符合要求。

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 08:11 编辑 ]

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作者: ttkl533 时间: 2010-9-2 17:59

调整分析方法～

2.8min左右一般是进样后系统死体积造成的波动，所以你在空白里也能看到。
另外，你的检测波长是210，接近甲醇等的末端吸收，所以基线会比较难看。

作者: HEC_css 时间: 2010-9-2 18:02

空白峰不就是溶剂峰吗？溶剂和流动相是一样的吗？
检测波长选在210nm，甲醇的末端吸收在205nm，应该也有一定的影响吧

作者: unknow 时间: 2010-9-2 18:13 标题: 回复 #1 zhangyandong4 的帖子

空白出峰只能是溶剂峰了。

如果丙氨酸是需要控制的杂质，
1、有其他方法进行控制，那液相有关物质检查这项就可以不包括它，不必积分
2、没有其他方法控制，就需调整流动相比例（增加水的比例），使其跟溶剂峰分开，再积分。

作者: NVIDIA 时间: 2010-9-2 20:31

请问你的空白是打一针溶剂还是直接inject?

作者: 饮食男女 时间: 2010-9-2 20:32

1。进一针流动相，看看那个峰是从哪里来的？

2。那个杂质是不是你们需要控制的？如果不需要控制，那就可以不管；如果要控制，那就要重选方法了

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 07:37 标题: 回复 #3 HEC_css 的帖子

我用的就是流动相溶的，进的空白溶剂就是流动相。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 07:42 标题: 回复 #6 饮食男女的帖子

此肯定需要控制的，含量还不小，国家药典有用薄层色谱方法控制，但是小弟不大熟练那个分析方法，而且即使将此杂质分开来测，那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的，所以它影响杂质的总量。小弟有点笨，希望老师给与指导，谢谢。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 07:43 标题: 回复 #5 NVIDIA 的帖子

我们的空白溶剂是流动相，直接进的流动相。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 07:46 标题: 回复 #4 unknow 的帖子

1、药典上有薄层色谱的方法进行控制，但是有关物质需要知道总量，因为丙氨酸的含量无法定量，所以总量是很影响的。指导法则杂质的总量不能超过2%，而药典的对丙氨酸的控制为1%以下。
2、流动相的水和有机溶剂的比例，我调试过了，丙氨酸的峰始终在2.8-3.1之间，很让我崩溃。
希望老师指导。

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 07:49 编辑 ]

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 08:14

上传两张图片，这样更加明了，谢谢老师的回复。

作者: header 时间: 2010-9-3 10:17

甲醇的溶剂峰

作者: liuzhangwee 时间: 2010-9-3 10:18

柱子有多长？有没有可能是溶剂？

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 11:01 标题: 回复 #12 header 的帖子

进流动相按理能消除此峰的，请问有没有办法消除这个峰啊。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 11:02 标题: 回复 #13 liuzhangwee 的帖子

250㎜*4.6㎜ 5um

作者: Erica2088wr 时间: 2010-9-3 11:09

流动相比例改变下试试看！

作者: DragonsABC 时间: 2010-9-3 11:10

可以进一个空白的溶剂（就是不加你的主产物），然后用机器自带的软件把这个空白的溶剂峰消掉试试

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 11:17 标题: 回复 #16 Erica2088wr 的帖子

流动相比例改过了，很多比例都试过。还是不行。。。。。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 11:18 标题: 回复 #17 DragonsABC 的帖子

这样操作可以吗？不知道那种液相能消除空白溶剂的峰啊。。。。。

作者: LUMGR 时间: 2010-9-3 11:24

你想解决的问题是什么？
我感觉是否流动相被丙氨酸污染了

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-3 11:53 标题: 回复 #20 LUMGR 的帖子

进流动相时不出峰
或者丙氨酸的出峰时间不和此峰重叠就行。

作者: thereyoube 时间: 2010-9-3 17:42

首先要排除是不是流动相和色谱柱有问题,如果两种都没问题,那就不应该把那个峰积出来!!

作者: 饮食男女 时间: 2010-9-3 20:38

QUOTE:

原帖由 zhangyandong4 于 2010-9-3 07:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
此肯定需要控制的，含量还不小，国家药典有用薄层色谱方法控制，但是小弟不大熟练那个分析方法，而且即使将此杂质分开来测，那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的，所以它影响杂质的总量。小弟有点笨，希望老师给与指导，谢谢。 ...

3分钟那个是你需要的物质吗？信噪比小于10，没法定量啊。

如果想增加丙氨酸的保留时间，可以把pH再降低点试试；但是不知道会不会对主要物质的分析有没有影响、、、

个人看法。

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-4 08:29 标题: 回复 #23 饮食男女的帖子

我马上就去试试，只要丙氨酸的峰后移就行，改变PH只是调到3就没有往下调过，今天改改看看，希望有用。谢谢

作者: zhangyandong4 时间: 2010-9-4 08:32 标题: 回复 #22 thereyoube 的帖子

小弟很笨，就只会简单的操作，不会那些很复杂的，我感觉不应该是柱子和流动相问题，至于那个峰如何让他不积分，不知道老师可不可以教教我，我们这里有戴安也有岛津的。谢谢……

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-4 09:13 编辑 ]

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