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标题: 【求助】请教小肽分离方法 [打印本页]

作者: daod 时间: 2014-5-7 12:13 标题: 【求助】请教小肽分离方法

先从海洋细菌发酵液中发现有抗菌小肽,预计为30左右氨基酸,请教各位高手如何实现分离纯化?

作者: glass 时间: 2014-5-7 12:13

不同的小肽方法应该不一样，可以参考相关的文献，然后在自己摸条件。不过如果是能耐抗菌的话，就要在分离纯化过程中主要无菌操作，不然可能得到量应该很少。

作者: yueban-1147 时间: 2014-5-7 12:16

一般是用反向柱分离

作者: bamboo16 时间: 2014-5-7 12:16

量有多少？可以尝试用膜分离方法！

作者: huifeng0516 时间: 2014-5-7 12:17

还是在预处理样品以后使用反向-HPLC的“制备柱”分离
应该是最佳的吧

作者: xyw5 时间: 2014-5-7 12:18

小分子多肽用RP-HPLC分离比较普遍，关键是选择什么柱子了，有许多公司卖C18，C8和C4等多种做分析和制备的柱子，可根据你的小肽性质进行选择。

作者: summerxx 时间: 2014-5-7 16:16

30个AA的多肽可能用C18柱比较合适

作者: tangxin_80 时间: 2014-5-7 16:17

我想问一下楼主，你是如何判断你的活性物质是小肽的，我也正做这方面试验，我的活性物质发酵液萃取只能溶于正丁醇，热稳定性很好，大概是什么物质，怎么判断。

作者: mysmdbl 时间: 2014-5-7 16:18

请问一下，在做rp-hplc时，因为是未知样没有标样，如和才能确定洗脱条件合适，所有的峰都已经分开了呢？

作者: redbutterfly 时间: 2014-5-7 16:20

洗脱条件是很难摸索的，有的时候不同的样品跑出来的图像是一样的，真烦人，也只有你纯化好再上液相吧！

作者: 831226 时间: 2014-5-7 16:21

做过类似实验，用的是反相-HPLC，C-18柱
然后冻干浓缩，再跑Tricine-SDS-PAGE检测。

作者: memory 时间: 2014-5-7 16:21

相关疾病：
精神分裂症
1,无需无菌,
2, 先建立一个C18检测手段。
3,不要直接上预装的反相柱，因为发酵液里什么都有，即使微滤后，大分子蛋白之类的东西也会堵住，柱子很快就不行了。用自己装的是大颗粒常压，进行预处理，自己再生和重装也容易。也可以考虑G25除去大分子物质。用你的HPLC C18监测。
4,HPLC检测流出的峰，收集，旋蒸或稀释到下一步上样的浓度。再用预装柱C18精分，收集峰，OK，进行鉴定。。。

作者: xue258 时间: 2014-5-7 16:21

对於细菌的抗菌小肽，常用的手段为三个步骤，第一步可用硫安沈淀（70％）再透析，或是以斥水性分离法(hydorphobic interaction, 常用的有Amberlite XAD-16). 第二步以阳离子交换管柱分离，最後用反相HPLC纯化。由於细菌的抗菌小肽的物性大都相似：小分子（2-6 kD)，带正电荷，斥水性，所以目前细菌的抗菌小肽有关的发表论文，都是以同样的程序进行纯化。
所以要纯化某物质时，若事先知道其物性，便可作以依据来设计纯化方法。

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