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标题: 【求助】请做细菌膜蛋白的高手指点 [打印本页]

作者: bring 时间: 2014-5-8 15:49 标题: 【求助】请做细菌膜蛋白的高手指点

这是我提取全膜蛋白的方法
1. 50mM Tris-HCI pH 7.6 1mM EDTA 清洗4次
2. 50mM Tris-HCI pH 7.6 0.07mM EDTA加DTT浓度到1mM的超声破碎液破碎细菌
破碎程序5 S on/5 S off 75%的功率(小探头)
3. 15000G离心15分钟
4. 上清再离心100000 G 45分钟
5. 用超净水清洗离心沉淀表面之后用双向裂解液溶解.处理后直接跑双向
经过以上处理我跑双向后点非常多应该有几百个,将这样的样品进行比较找蛋白点差异可不可行?
我处理后的样品肯定混有很多的非膜蛋白,这对结果是不是有影响?如果有影响我又该如何改正?

作者: u76mp 时间: 2014-5-8 15:49

我也想做这方面的实验，我以前做膜蛋白时，也是可以得到几百个点。但是问题是我抠点做MALDI-TOF后，却得不到结果，所以看着那么多点，只好发呆，最近暂停了实验，想想是不是用其他方法可以得到这些蛋白点是什么蛋白。
帮你一起顶，希望大家一起来讨论。

作者: bring 时间: 2014-5-8 15:50 标题: 回复 #2 u76mp 的帖子

你说的没结果是不是打出来的点都不是膜蛋白,
厦门大学有一个教授彭宣宪他做蛋白质组很有名是蛋白质组学杂志的审稿人在上面发了很多文章.
他告诉我提膜蛋白加碳酸纳效果更好

作者: junjie05 时间: 2014-5-8 15:50

楼主你好。我也是做细菌膜蛋白的。我的提取全膜蛋白的方法和你基本一样，而且我提的膜蛋白在普通SDS－PAGE上条带很多，很正常。但是做双向时点却很少，只有稀稀拉拉的十几个。但是我做的胞内蛋白组分双向电泳的图却很好。请问在提取膜蛋白后做双向电泳的时候，有没有什么要特别注意的以得到好的结果？不甚感激！

作者: u76mp 时间: 2014-5-8 15:50

没结果,是到数据库里收索, 没有找到对应分子量和PI的蛋白质. 所以那些点也不知道是什么蛋白.
或者是我的方法不对,也没人问,所以最近不做了,直接跑SDS-PAGE. 把分开的条带拿到公司去做, 让他们去分析.反正老板出钱.

作者: xue258 时间: 2014-5-8 15:51

做以下碳酸盐处理，文献很多

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