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标题: 【求助】老板严厉要求:纯化出有活性蛋白质 [打印本页]

作者: dmg 时间: 2014-5-9 23:01 标题: 【求助】老板严厉要求:纯化出有活性蛋白质

本实验室构建一具有抗菌肽功能蛋白质，纯化后page电泳显示一条带，质谱鉴定表达蛋白分子量正确，但一直没有抗菌活性。
构建pet25b，pet32b两个表达载体，分子量11KD，生物信息学分析抗菌功能在N端。
国外发表一篇文献（仅对XLblue有抗菌活性，其它未见报道），N端氨基酸为GE，本实验室构建为YSGE，不知有没有关系。
本实验室上游构建由同事完成，但老板一定要我纯化出有活性蛋白质，急啊啊啊啊啊！！
希望能提供一种思路，或有实验室能提供蛋白质纯化服务，费用好商量。
拜托！

作者: bring 时间: 2014-5-9 23:02

要是没有生物学活性，那什么电泳，质谱都仅仅是摆设，大概没用。
先作菌体裂解液的抗菌活性，假如显示诱导产物有抗菌活性，那么可以做纯化工作。纯化蛋白质是有一点难度，但是也充满了乐趣。
还是自己做吧。要是一切都能靠钱解决问题，那我想，下一届的诺贝尔奖得主都是温州老板。

作者: hulu呼噜 时间: 2014-5-9 23:02

严重同意楼上的观点
没活性的的东西基本不必抱太大指望

作者: 小糖块 时间: 2014-5-9 23:02

基因工程生产的蛋白质，很多都是没有活性的，这是因为，虽然蛋白表达出来了，但是，并没有折叠，有些形成了包含体，另外一些虽然在胞质中可溶，但是也没有折叠成正确的构象，这些蛋白当然就不会有生物活性了。
所以，首先你要把纯化好的蛋白看看是不是折叠了，这个你可以第一用CD，看看是不是有二级结构，更准确的是用NMR方法，扫一个一维谱，看看H的化学位移分布。
如果没有折叠，也许你就要考虑或者复性、或者更换一些有可能促进折叠的载体了。
一般来说，只要蛋白折叠了正确的构象，就会有功能了。

作者: cbou876 时间: 2014-5-9 23:03

抗菌肽在原核里要么表达不出，要么是包涵体，我还是建议你选酵母表达载体或别的吧，以前我们实验室做抗菌肽，在原核没有表达出来，毕赤酵母表达有活性的

作者: tuuu2 时间: 2014-5-9 23:03

如果蛋白表达在破菌上清，但是没活性，是否就意味着即使纯化或采取其它办法处理这个蛋白溶液，也很难有活性啊？Shy

作者: leifengta 时间: 2014-5-9 23:03

我的抗菌肽是包涵体表达的，现在要进行复性，纯化出有活性的蛋白，不知怎么做，希望各位学长帮忙！

作者: gogo 时间: 2014-5-9 23:04

你的蛋白含有标签吗?
怎么测活的啊?

作者: milkdog 时间: 2014-5-9 23:04

抗菌肽要是在大肠表达出来就有活性,还不把菌都给杀了.
做复性吧.查一查参考文献.

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