分析测试百科

标题: 【求助】关于一抗的用量以及孵育的方式 [打印本页]

作者: 6327555 时间: 2014-5-10 16:08 标题: 【求助】关于一抗的用量以及孵育的方式

大家好
做wb,
首先我用的抗体u说明书的推荐是1：1000（chemicon）,请问大家我用1：2000可以吗？因为一共也就30微升，感觉用几次就没有了。
第二：大家一抗孵育一般是多大的体积？ 3毫升还是5毫升？ 5毫升很心疼啊
第三:具体是如何孵育的？看大家都说用袋我还没有见过呢！

作者: glass 时间: 2014-5-10 16:09

1.商家推荐的稀释度一般是很保守的，1：2000应该没问题.
2.有专门的袋子，很便宜，不到10元吧，有几百个.
3.一张8.3*5.6 cm大的膜用2-3ml足够了，当然你如果裁减的话可以用更少.孵育其间最好20分钟摆弄下袋子，以防膜与抗体接触不均.

作者: hulu呼噜 时间: 2014-5-10 16:09

还是按照说明书用比较好，可以用其他办法节省抗体：
1.抗体稀释液的体积可小些，将转的膜装入封口膜，用封膜机将封口膜边缘压的尽量小，不要压着转的膜就行，加入的体积够覆盖膜就行，一般1～2ml就够了。
2.一抗用过一次后，加0.1% 叠氮钠－20℃保存，可循环用4～5次，每次用时可再新加一点一抗。

作者: 2541 时间: 2014-5-10 16:10

还是按照说明书用比较好，可以用其他办法节省抗体：
1.抗体稀释液的体积可小些，将转的膜装入封口膜，用封膜机将封口膜边缘压的尽量小，不要压着转的膜就行，加入的体积够覆盖膜就行，一般1～2ml就够了。
2.一抗用过一次后，加0.1% 叠氮钠－20℃保存，可循环用4～5次，每次用时可再新加一点一抗。
......

=======================================================================

请问加0.1% 叠氮钠的作用是什么呢？有人说直接保存抗体在4度就行了？

作者: glass 时间: 2014-5-10 16:12

请问加0.1% 叠氮钠的作用是什么呢？有人说直接保存抗体在4度就行了？

=================================================================

用过一次的一抗稀释液（加了脱脂奶粉或TBST）可加0.1% 叠氮钠保存延长其循环利用的次数。

作者: ritou1985 时间: 2014-5-10 16:16

抗体最好按照说明书来稀释，我们用反贴法孵育一抗，1.5*4cm的膜用约200微升抗体就可以了

作者: u234 时间: 2014-5-10 16:16

可以详细的谈谈反贴法吗？
我尝试过一次，总是溢出来啊

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)