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标题: 【求助】SDS电泳胶不凝 [打印本页]

作者: 云端ing 时间: 2014-5-20 13:28 标题: 【求助】SDS电泳胶不凝

近来要做SDS了，结果药品配完后不凝，试着放到37度里了，还是不凝，***各位大侠了

作者: ritou1985 时间: 2014-5-20 13:28

如果你的配方是正确的话，那就是哪个试剂失效了。
只有可能凝得快慢的情况，不可能不凝的。

作者: zranqi_1 时间: 2014-5-20 13:29

楼主再好好做一遍试试，我刚做时也有过这样的情况，后来发现是弄昏了头，东西的比例都不对了。
假如不是这方面的问题的话估计就是试剂的问题了吧，是不是没配好或着放时间太常了？

作者: eve_49 时间: 2014-5-20 13:29

我也遇到过胶不凝的情况，在当前的室温下，我一般是等20分钟左右才可以凝，分离胶、浓缩胶都多等一会儿

作者: 49888 时间: 2014-5-20 13:29

聚丙烯酰胺凝结主要是光反应，热反应是其次。天冷了，光线也少了，在你灌完胶后，你可以拿个白炽灯照射，也可以适当的增大APP和TEMED的量，就可以了，

作者: BOSS2011 时间: 2014-5-20 13:30

我觉得你的胶不凝的原因有如下几点：1.丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例是不是不对；2.过硫酸铵有没有失效；3.放置时间是不是太短，天冷时，凝固的时间较长；4.分离胶加完后有没有封闭，如果不封闭就很长时间都不凝。这是本人的一点建议，希望能对你有所帮助。

作者: 蒲公英 时间: 2014-5-20 13:30

如果丙稀酰铵和甲叉双丙稀酰铵的比例和TEMED的量适当的话,要考虑过硫酸铵一定要现配现用!因师妹也有类似的现象发生过.

作者: IAM007 时间: 2014-5-20 13:30

boss2011回答的较全面，做点补充检查过硫酸铵有无过期，可以取1.5ML离心管加入1ML水+0.1~0.2g AP立即放在耳边，听听有无发出咔嚓、喀嚓的声音，有则AP没过期，没有则过期。AP保存得好能用很久的。

作者: vvmmoy 时间: 2014-5-20 13:31

minriver验证AP过期没有的方法很奇特，不知其原理是什么？

作者: JK.jon 时间: 2014-5-20 13:31

多加点TEMED

作者: DNA 时间: 2014-5-20 13:31

APP和TEMED量或是活性，最好新配

作者: qqq111 时间: 2014-5-20 13:32

我们前一阵子也遇到类似情况，你们实验室如果其他人也做胶的话，可以先借点他们的TEMED和APS试试，逐一排除原因，一般都是这两种催化剂的问题。建议TEMED和APS量最好按方案加，过量虽然凝得快，但可能导致胶的不均匀凝固，影响电泳结果。

作者: yychen 时间: 2014-5-20 13:32

一般胶不凝，过硫酸铵的问题最常见，过硫酸铵一定要新鲜配制，不能偷懒，之前配的最多能在4度放一周，我为了保险，每次都是新配。

作者: wawa 时间: 2014-5-20 13:32

变性电泳胶不凝，首先最可能的原因就是过硫酸铵和TEMED试剂的问题，楼主应先排除这两个试剂是否出了问题，过硫酸铵一般受潮即失效，每次做电泳最好新鲜配置。
其次聚合时间与温度是有一定关系的，凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂过硫酸铵和加速剂TEMED，在温度低的情况下，可以适当加大以上两种物质的用量。另外还可以采用提高室温，预热配胶溶液等方法来加速胶的凝结。我们实验室的一位老专家建议采用增加光照的方法，就是用灯来照射装好胶的玻璃片效果也不错。
我曾经试过用吹风机加热，也能加速胶的凝结，不过这种方法不可取，会把胶面吹歪。

作者: 小糖块 时间: 2014-5-20 13:33

其实最主要的是怕AP失效，因为一旦潮解，就很难起作用。。。

作者: popo520 时间: 2014-5-20 13:33

AP响也不一定能凝
能凝也不一定能凝匀。。。
总之很麻烦
师兄交代要用玻璃器皿配AP
试用有效后可分装成小份存在－20度
每次化一支 4度一周内使用

作者: tangxin_80 时间: 2014-5-20 13:33

排除法解决问题，如果方便的话，可以借用别人的（好用的），APS和丙烯酰胺，其余的用自己的，不凝的话，那就三种（包括temed）都借用别人的（哈哈，过分了啊，），还不凝的话，那就建议缓冲体系重新配，或者劳驾高手配，哈哈，要是这些都解决了，还是不凝的话，不过这个怎么可能呢！！！
抓紧，不要在凝胶这个问题上浪费太多时间！因为后面还有的忙。呵呵

作者: orangecake 时间: 2014-5-20 13:34

TEMED还是不要多加的好，真的容易导致胶不均匀。可采用增加光照的方法，加热要注意胶上下温度一致的问题，我猜测还是可能你的APS出问题了。总的说来胶还是很好凝的，慢慢来，不要着急不要着急呵呵

作者: toy 时间: 2014-5-20 13:34

请问楼主，你的问题现在解决了吗？找到了什么原因？我目前也遇到了同样的问题，一个星期了，一直徘徊在胶不凝上，到现在还没有找到原因。我的过硫酸氨是九三年买的，有部分潮解，但以前用的时候还可以，只是最近胶总不凝。temed是新买的，应该没有问题。所有的试剂都是用高纯水配制的。
再问一下各路高手，配试剂的水必须是双蒸水吗？我用的过滤器过滤的水，以前也是用这个，成功过，但现在我实在没有办法了。
谢谢了！

作者: 8princess8 时间: 2014-5-20 13:34

我觉得可能是Ap的问题

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