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标题: 【求助】用盐酸胍溶解的蛋白样品怎样过柱纯化？ [打印本页]

作者: cbou876 时间: 2014-6-9 16:20 标题: 【求助】用盐酸胍溶解的蛋白样品怎样过柱纯化？

我在包涵体纯化复性的问题上遇到麻烦了，我用盐酸胍溶解了我的样品，然后准备过ＱＩＡＧＥＮ的ＮＩ－ＮＴＡ柱，盐酸胍溶解的很好，我的师姐表达的蛋白溶解于８Ｍ尿素，她用的缓冲液和洗脱液都是含有８Ｍ尿素的，她纯化很成功，我用的是PQE31载体含６ＨＩＳ的，我用盐酸胍溶解的样品过柱的时候怎么配置我的缓冲液和洗脱液？可以继续用含８Ｍ尿素的缓冲液和洗脱液吗？具体怎么样操作，我是新手，老板催的很急！！希望大家帮帮我！！

作者: cbou876 时间: 2014-6-9 16:23

我的蛋白在８Ｍ尿素不溶解，只有用盐酸胍溶解

作者: yes4 时间: 2014-6-9 16:24

那就用盐酸胍配缓冲液和洗脱液呗。

作者: eric930 时间: 2014-6-9 16:24

可以用盐酸胍溶解的蛋白上柱后，用８Ｍ尿素的洗脱液洗，这样也会方便跑胶。

作者: cbou876 时间: 2014-6-9 16:24

我用盐酸胍溶解的蛋白上柱之后（我用的是ＱＩＡＧＥＮ的小ＮＩ柱子用离心的那一种只能装６００微升的上清液）
我先用８Ｍ尿素缓冲液平衡后，用盐酸胍溶解蛋白上柱之后就象堵住了，怎么都离不下来，是因为什么原因？是因为我的尿素浓度不够吗？

作者: cbou876 时间: 2014-6-9 16:26

我的尿素配置了已经快两个月了，不知道是不是因为我的尿素过期的原因

作者: finger 时间: 2014-6-9 16:26

样品的浓度不要过高，此外尿素需要新配的．

作者: cbou876 时间: 2014-6-9 16:27

我的柱子是用buffer Ｂ　Ｃ　Ｄ　Ｅ四种缓冲液
它们的成分都一样　尿素８Ｍ
　　　　　　　　磷酸二氢钠 0.1M
Tris .cl 0.01M
就是ＰＨ值不同　分别是　８　　６.３　　５.９　　４.５
利用ＰＨ值不同来逐步洗脱杂蛋白，并在最后把目的蛋白洗脱下来
你看有没有什么问题　然后和我的盐酸胍浓度有关吗？是不是越低越好？

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