本人新手,没有能力回答您的问题,但是想请教您,本人拟采用GST pull down 作蛋白质的相互作用。大致思路:已采用免疫共沉淀确定A与B存在相互作用,且获得了A&B的真核表达质粒。现将A分为七个结构域,进一步确定A与B的互作域。请问1)将A及其截短的基因片断所表达的蛋白质作为bait蛋白还是将B作为bait蛋白合适?2)prey蛋白如何获得?请高手救急,多谢高手指点。作者: she 时间: 2014-6-9 16:51
1)将A的片段作为bait蛋白合适,因为,pull down 下来的产物需要用另一蛋白抗体做Western检测。B蛋白是有抗体的,A的七个片段能都有抗体吗?
2)Western检测;作者: yes4 时间: 2014-6-9 16:51