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标题: 【求助】SDS-PAGE 跑胶图像不理想！ [打印本页]

作者: coolcool 时间: 2014-6-9 17:42 标题: 【求助】SDS-PAGE 跑胶图像不理想！

我的蛋白条带（详见附图）一直是只能够跑出上部分蛋白条带，预期的目的条带一直没有，大约34kda,好像上样量已经很大了，甬道的条带很深了已经！！蛋白MARKER也是一致成梯形出现！！从图像中可以看到的跑胶问题请各位大虾指点！！小弟亟盼！！

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作者: yes4 时间: 2014-6-9 17:42

样品盐浓度太大就会这个样子，不知道你的样品是全细胞蛋白还是纯化的，怎么处理的？增大上样量不会使条带变清晰。

作者: ritou1985 时间: 2014-6-9 17:44

检查一下电泳缓冲液对不对

作者: coolcool 时间: 2014-6-9 17:44

电泳缓冲液没问题，分离胶和浓缩胶的PH都没问题啊！？？？

作者: nvdabing 时间: 2014-6-9 17:44

你的胶浓度是多少？34kda的蛋白用10%的胶就可以。你在配胶的时候是不是没混匀？

作者: coolcool 时间: 2014-6-9 17:45

我的分离胶浓度是20%的,有点大但是对条带的影响应该不是很大巴?好像之影响跑胶的速度!!配胶的时候是充分混匀的啊!

作者: wood533 时间: 2014-6-9 17:46

样品上样前最好处理一下，煮沸几分钟后离心取上清使用。

作者: H2O 时间: 2014-6-9 17:46

重配电泳液,在4摄氏度电泳

作者: wood533 时间: 2014-6-9 17:47

一般电泳温度最好不要太低，因为SDS或尿素等在低温下析出，影响电泳结果。最好控制在十几到二十几度。普通的SDS－PAGE不用控温，室温即可。

作者: minran_1980 时间: 2014-6-9 17:48

1.电泳缓冲液是不是重复利用了,每次最好用新的;
2.我觉得可能是染色,显色过程中出现了问题,你看你的胶除了Marker带,其他几乎都黑一片,我觉得即使跑胶不理想,分离不清楚,但也不至于胶全是黑的;
洗涤,染色过程中用的水应该是去离子水,
染色时,硝酸银量低一些,
显色的时候甲醛加少一点,慢慢显色;
3.Marker的量我觉得还可以低一点.

作者: minran_1980 时间: 2014-6-9 17:48

建议用10%的胶跑尝试一下
电泳缓冲液重复使用最好只有一次
蛋白样品加入SDS
另外仔细看一下你的抗体的说明书对蛋白变性的要求是煮沸几分钟还是37度半小时等不同要求

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