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标题: 【求助】marker跑成这样是何原因，为何sds-PAGE下半部... [打印本页]

作者: woshiduiyan 时间: 2014-6-9 18:07 标题: 【求助】marker跑成这样是何原因，为何sds-PAGE下半部...

marker跑成这样是何原因，为何sds-PAGE下半部分条带跑不清楚？

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作者: rxcc33 时间: 2014-6-9 18:07

如果你的样品和marker是用同一样品缓冲液处理的话，就是你marker本身的问题了，因为样品跑得很好，这可排除是胶的问题．建议换另一批marker一试．

作者: babybabe 时间: 2014-6-9 18:08

我也出现了这种情况，不知是什么原因，所有的溶液重配了还是不行，都快两个月了，始终跑不出一张好的电泳图，我都快说tmd的了，有人说是阳极的原因，我检查过也没问题，只剩下样品的问题了，可是我以前处理的样品都没问题，一直到胶的下缘，条代都是清晰的，见鬼了！现在我正在改变处理样品的方法。有新情况会及时联系！

作者: xue258 时间: 2014-6-9 18:08

跑SDS-PAGE 带有一定的随机性，会有时跑的好，有时跑的差，所以需摸出一定的条件。当将一切条件稳定后，条带就会一直跑的很漂亮，而且，也不会再让人繁心了。
1. 从图上看出，你好象是做原核表达。如果是的话，我可以说你的蛋白表达没有问题，目的条带也很清楚，分开的层次还行。
2. 胶的配置问题
我不知道你的胶的配方，如果配方问题排除的话，那就是实验操作原因。
比如说：你的MARKER上样孔处是否排除了气泡，是否样品混合均匀。如果有气泡的话，影响MARKER的分辨率。
3.加样量
很明显，你的第二个MARKER 加样时已经漫出加样孔了，所以会有波浪形。
4.MARKER有拖尾现象，考虑胶的配置问题，电压高低。
5.我在做的时候，蛋白MARKER的最下面两条带一直很模糊，具体的原因我也在考虑中，可能原因是MARKER 降解了（它也是蛋白质啊）
呵呵！大家一起来讨论啊！

作者: qianqin1977 时间: 2014-6-9 18:08

你灌胶之前是否把玻璃板洗干净了（也许玻璃板不干净导致胶灌的不均匀），我每次都用洗涤剂把玻璃板洗干净，后用95%酒精擦拭，晾干。
你的marker是不需要处理直接上样的吗？也许marker时间久了，成分有变化。

作者: woshiduiyan 时间: 2014-6-9 18:09

谢谢各位的建议，我的玻璃板只是用洗手液清洗后用超纯水冲洗，晾干的。也很干净，应该不是这方面的原因吧。

作者: ending 时间: 2014-6-9 18:10

1. stacking gel 的浓度是否过高？4%试试。
2. 电压过高？100V，40mA.

作者: dog002 时间: 2014-6-9 18:10

1.同意楼上，可能电压过高。
2，胶体凝结不均匀，可仔细看看胶体的配方

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