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标题: 【求助】关于蛋白定量！酶标仪和紫外分光光度计！ [打印本页]

作者: seagate 时间: 2014-6-9 22:14 标题: 【求助】关于蛋白定量！酶标仪和紫外分光光度计！

今天用考马斯亮蓝定量蛋白质，因为以前用酶标仪没有595nm的，所以今天特意用紫外分光光度计测了，595nm，0.7几，又换570测了0.6几，又换630测得0.8几；结果我又把一样的样本用96孔板在酶标仪上测，结果570nm只有0.2几，630也是0.2多，比570的大点；这数据也叉太远了吧！
用的是伯乐的酶标仪，样本是1ml染液，90ul水，10ul蛋白提取液。
紫外分光光度计的牌子忘了。我想问问用这种方法定量蛋白质的大虾你们是用酶标仪的哪个波长测的阿？？OD值是多少阿？
今天真是郁闷Sad把裂解液弄脸上了，里面还有PMSF

作者: fei1226com 时间: 2014-6-9 22:15

蛋白质浓度（mg/ml）=1.45OD280－0.74OD260 （此为经验公式，即以不同浓度的蛋白质和核酸混合测定的数值所建立的）。

作者: ns5fan 时间: 2014-6-9 22:15

A=KCl
分光光度计和酶标仪的l不同，怎么比较A？看你的数据不同波长的A比值应该是差不多的，数据还是基本可信的。

作者: seagate 时间: 2014-6-9 22:16

QUOTE:

原帖由 ns5fan 于 2014-6-9 22:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
A=KCl
分光光度计和酶标仪的l不同，怎么比较A？看你的数据不同波长的A比值应该是差不多的，数据还是基本可信的。

不好意思，没看懂你的公式啊？我的问题是如果用酶标以测得OD值太低得话，数值好像不合理啊！我想问问也用酶标以测蛋白得大侠们你们得数值也是如此吗？

作者: ns5fan 时间: 2014-6-9 22:16

Lambert－Beer定律：吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积呈正比。
酶标仪和分光光度计的液层厚度不同，所以吸光度也不同，但是
在一定波长下公式中K是一定的，样品浓度也一样，所以在相同波长下的酶标仪和分光光度计的吸光度的比值是一样的，
比如分光光度计测得A570=0.6 A630=0.8
酶标仪测得A'570=0.2，则可以算出A'630=0.2*0.8/0.6=0.267，A/A'=l/l'，分光光度计的l=1cm，则酶标仪的液层厚度l'=1*0.2/0.6=0.33cm

作者: viviwang1987 时间: 2014-6-9 22:17

吸收原理不同，没办法去比较

作者: seagate 时间: 2014-6-9 22:18

谢谢大家，那能拿酶标仪测蛋白吗？得到的数据也可以做标准曲线吗？

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