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标题: 【求助】配PAGE胶时，下层凝，上层不凝 [打印本页]

作者: tuomu45 时间: 2014-6-18 10:42 标题: 【求助】配PAGE胶时，下层凝，上层不凝

各位大虾
我在配SDS-PAGE胶时,分离胶凝的很好，浓缩胶怎么弄也不凝，是怎么回事啊，除了两者的缓冲液不一样，其他的都一样。有大虾遇到类似的情况吗？Help!!

作者: mimili_901 时间: 2014-6-18 10:42

一是不是ＡＰＳ或者ＴＥＭＥＤ没有加？
二用的缓冲液是不是时间太长了，ＰＨ值已经不准了？

作者: 33号 时间: 2014-6-18 10:43

可尝试将AP和TEMED加倍！

作者: remenb 时间: 2014-6-18 10:43

1.大多数情况下是APS问题!
我的APS都是小份分装,-20度保存,只冻溶一次就仍掉!
2.上层胶稀,APS可多加1/5体积,耐心点等,要30min!

作者: 49888 时间: 2014-6-18 10:44

下层凝说明公用的药没问题
上层不凝你看看它和不同下层不同的试剂
我认为只要是tric-hcl
你把你制胶配方发上来看看

作者: tuomu45 时间: 2014-6-18 10:44

谢谢各位热心的大虾
我也怀疑浓缩胶缓冲液（tric-hcl，PH6.8）有问题，重新配了，其他试剂与分离胶公用，应该没有问题，每次分离胶都能凝，而浓缩胶无论4度，37度，室温过夜都凝不好。而且现象实在是怪，浓缩胶梳子下面可以凝，但梳子之间却不凝，（已经多次了，排除未混匀），所以无法形成齿，没法上样啊，APS,TMED均加倍也无用啊。正准备灌入琼脂以形成孔

作者: guagua 时间: 2014-6-18 10:45

我前一段也碰到和你一样的情况，分离胶凝的很好而浓缩胶梳孔之间的胶不凝。最后换了APS就好了。强烈建议你换APS试试！

作者: 831226 时间: 2014-6-18 10:45

如果别的试剂都没问题aps和temed再多加些,
我有几次一次aps加80-100多u才会凝

作者: gogo 时间: 2014-6-18 10:46

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头痛
我现在也正为出现了这样的问题而头疼呢！分离胶能凝的话就不应该是APS的问题了啊，不过我把封条去掉以后分离胶底部总是有很多的水。我用的ACR贮液是2005年12月份的19：1的水剂，不知道是不是凝胶贮液的问题呢？？

作者: gogo 时间: 2014-6-18 10:46

谢谢各位热心的大虾
我也怀疑浓缩胶缓冲液（tric-hcl，PH6.8）有问题，重新配了，其他试剂与分离胶公用，应该没有问题，每次分离胶都能凝，而浓缩胶无论4度，37度，室温过夜都凝不好。而且现象实在是怪，浓缩胶梳子下面可以凝，但梳子之间却不凝，（已经多次了，排除未混匀），所以无法形成齿，没法上样啊，APS,TMED均加倍也无用啊。正准备灌入琼脂以形成孔

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请问一下楼主 :你的问题后来是怎么解决的啊?我现在遇到了你一样的情况,我怀疑是我的凝胶贮液的问题,今天重新配置了，准备试一下.
但是我的分离胶,浓缩胶buffer 均放置了一个月的样子,不知道对凝胶有没有影响呢???

作者: any333 时间: 2014-6-18 10:46

APS过期的可能性最大。以前我也做实验也出现过这种情况，当时我也以为既然分离胶都凝了APS应该不会有问题，但实际上就是它的问题。换过就好了。当时的情况是分离胶凝而浓缩胶凝不好（有时一块一块的，有时全不凝，有时梳子下凝）。
重配一下APS。

作者: gogo 时间: 2014-6-18 10:47

谢谢楼上的，我把凝胶贮液重新配了，APS也用新的，今天一试，效果比较好。

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