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标题: 【求助】EMSA的新手求助 [打印本页]

作者: idoww 时间: 2014-6-18 18:17 标题: 【求助】EMSA的新手求助

我是一个新手，我想用PIERCE公司的试剂盒（非放射性）来检测NF-KB的活性，我想问一下：实验室具备什么样的条件就可以做这样的试验了呢？如胶片曝光需要什么仪器之类的，还有CROSS-LINKING 等等，这些问题怎样解决呢？希望各位战友给我解答一下

作者: moonlight45 时间: 2014-6-18 18:18

不需要特殊的仪器，一般实验室都可以进行这个试验，胶皮曝光只要买一个暗盒（南京东路冠龙医疗器械店里有的买，100多元一个），至于紫外交联，可以用普通的紫外透射仪，就是扫描琼脂糖电泳图的那个设备，其他的需要一个暗室环境进行曝光和洗片子等。

作者: leifengta 时间: 2014-6-18 18:18

我想问一下那家公司可以合成生物素标记的探针，谢谢了。

作者: idoww 时间: 2014-6-18 18:18

我想再请教一个问题，在NF－KB的引物上标记生物素的话，标记哪端比较好呢？还有就是，NF-KB有无种属差别呢，选择通用引物不知可行吗？谢谢各位战友的帮助啦

作者: moonlight45 时间: 2014-6-18 18:19

如果需要标记的引物比较多，可以买piece的生物素标记kit，20个反应，2700多元，；如果只需要标记少量几条引物，可以去生工或者博亚合成，大概200多块钱一条引物。

作者: moonlight45 时间: 2014-6-18 18:20 标题: 回复 #4 idoww 的帖子

一般都是3'end标记，至于种属差别可能会有一点，但应该不会相差太大，你可以先用通用引物试一试

作者: idoww 时间: 2014-6-18 18:20

相关疾病：
感染
谢谢moonlight帮助，还有问题哟，就是用病毒感染细胞，在感染后的什么时间可以进行核蛋白的提取呢？我是想作病毒在NF-KB信号通路中的作用。

作者: daod 时间: 2014-6-18 18:20

你好！我也准备作EMSA 测NF-kB的活性。用非放射性的那种。我想请教一下提核蛋白你用的是什么方法。各种试剂配成贮存浓度后，当混合成缓冲液时如何配制成工作浓度。

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