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标题: 【求助】有没有人用过旋转蒸发仪干燥蛋白的？ [打印本页]

作者: lixi559 时间: 2014-6-19 10:12 标题: 【求助】有没有人用过旋转蒸发仪干燥蛋白的？

请问旋转蒸发仪干燥对蛋白活性有没有影响？

作者: remenb 时间: 2014-6-19 10:12

要看蛋白而定了，旋转蒸发过程中加热可能对一些酶的活性有影响。而且为了蒸发过程中不起泡要加入正丁醇，可能会引入杂质对以后的分离有影响。我曾经遇到过浓缩到一定体积后蛋白不溶的情况，可能是中间出现变性了。这还是很麻烦的，因为样品很有限，处理过程中的一些不利因素导致样品损失还是很可惜的。如果有条件的话建议冻干。

作者: NBA 时间: 2014-6-19 10:13

如果您要的蛋白很容易纯化，而且有文献（要最近的而且比较有影响力的）报道说可以这样做，我觉得可以试试（只是试试，效果如何还是要看实验结果）。
如remenb战友所说，如果有条件最好冻干。免得文章送出去别人提问题不太好回答。如果碰到一个较真的referee，坚持说你这样做蛋白变性损失很大，跟natural的蛋白差别太大，那可是整个试验体系的问题，麻烦得很。
供您参考。

作者: lixi559 时间: 2014-6-19 10:17

谢谢两位！
旋转蒸发仪的温度可控吗，太高肯定受不了啊
我的蛋白太小5kD，脱盐后稀释了，浓度很低，浓缩挺麻烦，有没有什么经济实用的法子啊？

作者: orangecake 时间: 2014-6-19 10:18

最好是用冷冻干燥。旋转蒸发其实主要利用水浴和负压浓缩液体的，温度可控。

作者: 莲花白 时间: 2014-6-19 10:21

对，用冷冻干燥的方法很好！

作者: zsxan1990 时间: 2014-6-19 10:21

氮气吹干温度也不高

作者: lixi559 时间: 2014-6-19 10:32

"氮气吹干"怎么做，没做过，需要什么设备

作者: avi317 时间: 2014-6-19 10:32

要看蛋白而定了，旋转蒸发过程中加热可能对一些酶的活性有影响。而且为了蒸发过程中不起泡要加入正丁醇，可能会引入杂质对以后的分离有影响。我曾经遇到过浓缩到一定体积后蛋白不溶的情况，可能是中间出现变性了。这还是很麻烦的，因为样品很有限，处理过程中的一些不利因素导致样品损失还是很可惜的。如果有条件的话建议冻干。
段先生
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作者: fsdd817 时间: 2014-6-19 10:33

建议用温敏凝胶一试

作者: 小糖块 时间: 2014-6-19 10:33

您好：我想问一下什么是温敏凝胶？它可以使蛋白浓缩干燥吗？

作者: H2O 时间: 2014-6-19 10:35

还可以用聚乙二醇吸水，并且试剂可以回收，先准备好透析袋即可。

作者: dog002 时间: 2014-6-19 10:35

用冻干可以,但是如果太大量就不好做了
建议先超滤浓缩,到了一定的量后在进行冻干.

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