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标题: 【求助】PVDF膜可不可以用丽春红染色？要注意什么？？ [打印本页]

作者: cbou876 时间: 2014-6-19 16:31 标题: 【求助】PVDF膜可不可以用丽春红染色？要注意什么？？

我做western，用PVDF膜，转移后用分子克隆上介绍的丽春红染色法，没有染出条带，但在同样条件下的硝酸纤维素滤膜上染出条带了，请高手指点！！！谢谢！Smile

作者: yonger 时间: 2014-6-19 16:32

可以染出条带的,你在确认一下你的丽春红的比例是否合适.是不是用的1*的.
其实丽春红的浓度也没有那么严格,我们的都反复用很多次,都没有问题.你可以借用别人的试剂用一下已确认你的丽春红没有问题
你的转膜条件是什么?
有没有问题,还需要确认一下.你转完膜考染一下胶,可以看一下又没有转过去.

作者: cbou876 时间: 2014-6-19 16:32

谢谢!帮助!我是在bio-rad湿转条件，而且NC和PVDF的转移条件是完全一样的，同时作的。考染胶后，膜覆盖处的蛋白没有了，应该转干净了。

作者: hold住 时间: 2014-6-19 16:33

肯定可以用丽春红染色的！1×丽春红染色10分钟左右，但然出的条带的确没NC膜清晰。应该是其他原因，能肯定使用两种膜时条件完全一样吗？PVDF膜转膜时是否对正极？

作者: remenb 时间: 2014-6-19 16:33

肯定可以用丽春红染色的！1×丽春红染色10分钟左右，但然出的条带的确没NC膜清晰。应该是其他原因，能肯定使用两种膜时条件完全一样吗？PVDF膜转膜时是否对正极？

作者: fei1226com 时间: 2014-6-19 16:33

丽春红是可以,但是时间久了就有可能有问题.
我碰到过丽春红染不出来,再用R250染却可以染出来的情况

作者: cbou876 时间: 2014-6-19 16:35

谢谢帮助，我用G-R250染过，发现膜全变蓝了，看不出蛋白，不知大家增麽做的，和染胶一样么？是不是要用脱色液洗好久，谢谢！

作者: u234 时间: 2014-6-19 16:35

R250只能染几秒钟就要去脱色时间长不易脱掉

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