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标题: 【求助】双向横纹 [打印本页]

作者: she 时间: 2014-6-21 09:33 标题: 【求助】双向横纹

请问一下，在酸端的横条纹是什么造成的呢

作者: zsxan1990 时间: 2014-6-21 09:33

这个你得把你的图传上来才好说，提供几个可能：
1.胶条与胶之间没有很好的接触，这是造成出现横条纹的一个重要原因，虽然不是一定出现在酸性段。你做过重复试验吗？是次次都是酸性端的话这个可能就小了。
2.不是你所说的横条纹是什么样子的？如果出现大面积的覆盖的话就有可能使核酸的影响。用核酸酶处理。
看看有没有符合你的情况的。
祝你试验顺利

作者: she 时间: 2014-6-21 09:34

有什么高见阿

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http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=25151

作者: she 时间: 2014-6-21 09:34

这是4-7的，3-10的整个都是横条纹了

作者: bluelake 时间: 2014-6-21 09:34

你是做什么菌的啊?
你的3-10是否也发现碱性端点较少啊?

作者: she 时间: 2014-6-21 09:35

是阿，你做的什么菌阿，我做乳酸菌阿

作者: owanaka 时间: 2014-6-21 09:35

我也是才做2D的，碰到和你一样的问题，我估计原因如下：
1，矿物油没有除干净，----用滤纸润湿后，多压下。
2，两性电解质没有除干净，------染色前用TCA固定下。
3，聚焦-----摸条件，看是聚集不足还是聚焦过度。
4，样品溶解不好，lysis buffer的成分一定要够。
5，平衡时间不要太长，引起蛋白扩散和蛋白丢失。
1，2个原因可能性小点，主要问题可能在3，4，5上。
做2D真的很辛苦，每一步都很关键，不容许出差错。要是做大胶的话，基本上每做一次都要熬夜。辛苦没什么，到是实验中，碰到的各样困难，不知道是那里出错，怎么解决，这真是让人沮丧。
人累，钱花得多，实验结果差，哎！！！发下牢骚。
祝成功！！！

作者: daod 时间: 2014-6-21 09:35

我做双向快一年了，也是碰到和你一样的问题:酸性端的横条纹,有时严重有时很少，但一直没有彻底解决.我摸索过很多条件,包括前面所有提到的.现在我认为主要和蛋白的溶解性相关,你的样品制备,从冰箱中取出化冻,和水化液混合后都要室温放置一个小时,保证蛋白充分溶解,样品上槽水化前用40000g离心半小时，保证未溶解的蛋白和大分子杂务完全沉淀.吸取离心后上清时动作轻一点，别把沉淀吸上去.
另外，从图来看,你蛋白上样量可以再大一些。

作者: she 时间: 2014-6-21 09:36

谢谢，确实少了好多！

作者: she 时间: 2014-6-21 09:36

不过还想问个问题，我重新制的样品以后，跑的图，只有上半部分有点，小半部分，就是小分子量的部分，以前还有的，现在就没了，成了半个图了，郁闷。

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