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标题: 【求助】关于SDS-PAGE的mark条带多数跑不出来 [打印本页]

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:27 标题: 【求助】关于SDS-PAGE的mark条带多数跑不出来

我在跑sds page 的时候，样品条带脱色后都很清晰，就是mark条带在脱色后，几乎看不到条带，我用的是上海生化的约14~97kDa 6 条带的mark，全是按照说明书上的做的，请前辈们帮我分析一下！
谢谢

作者: kewanqi2011 时间: 2014-6-21 17:28

可能是你的MARKER 上样量太少了，蛋白太少，加大MARKER 的上样量试了看看

作者: 68943512yao 时间: 2014-6-21 17:28

先说明你marker是预染还是非预染,你上了多少ul,用前有没有变性,有没有摇匀,说明书怎么说.你买了多长时间,如何贮存.
否则如何帮你分析?
实际我已说明可能原因
1 操作问题
2 降解问题
3 敏感度问题

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:29

可能是你的MARKER 上样量太少了，蛋白太少，加大MARKER 的上样量试了看看

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我的mark 是新购的，溶于200微升水，分装20小管加样品溶解液，水煮5min后于－20度冷存，用前又煮了5min。后来我也怀疑可能是上样量太少，就取了2个管mark上样于同一个孔道，退色后还是模糊不清，基本上什么没！555
那说明书上面的2×样品溶解液，我比较了一下相当接近文献中提到了4倍的溶解液！

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:32

先说明你marker是预染还是非预染,你上了多少ul,用前有没有变性,有没有摇匀,说明书怎么说.你买了多长时间,如何贮存.
否则如何帮你分析?
实际我已说明可能原因
1 操作问题
2 降解问题
3 敏感度问题
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先请问一下：什么是预染和非预染？
我的新购mark在处理的时候先溶于水在添加样品溶解液1：1后冷存的，每次使用前水煮5min，只是没有注意摇匀，是不是一定要摇匀？
还想请问一下敏感度问题指的是那些啊？

作者: u234 时间: 2014-6-21 17:32

先请问一下：什么是预染和非预染？
我的新购mark在处理的时候先溶于水在添加样品溶解液1：1后冷存的，每次使用前水煮5min，只是没有注意摇匀，是不是一定要摇匀？
还想请问一下敏感度问题指的是那些啊？

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既然你这么说了,估计一定是非预染的了,预染marker简言之就是有颜色的marker,跑电泳的时候就能看到,不用考染.
样品溶解液里含有甘油,会使marker沉淀,摇匀即为了这个目的.
敏感度和2楼的意思基本一样,是个笼统的概念.不过看你对2楼的回复那么不是操作问题(系统错误)就是marker本身的问题了?

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:33

我第一次配的mark 工15小管，只有3到4个吧跑后可以看到一些比较理想的条带，其他就不行了，晕的不行了...

作者: pengke1983 时间: 2014-6-21 17:33

产品的质量问题，蛋白含量太少了。我做的时候都是加倍用的，应该加20微升的时候我就加40微升，有时候情况还不错。

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:33

我也使用这种marker，也有同样的问题，以前还有少蛋白条带的问题，后来在marker里面加了2-mer后，问题解决了，不过还是不稳定，不过我的marker存了好久了，我现在准备换marker，这地方的marker不好。

作者: wood533 时间: 2014-6-21 17:34

请问各位，我想换mark试试看，哪里的mark 好一点的啊？
指条明路吧呵呵

作者: 2541 时间: 2014-6-21 17:34

Fermentas 应该是叫这个名，20ul就很清楚。

作者: applebook=213 时间: 2014-6-21 17:35

Fermentas的7ul就相当清楚，上20ul没必要吧？

作者: 3648755 时间: 2014-6-21 17:35

国产预染Marker 碧云天的很不错推荐一下一百多而已
个人感觉和invitrogen的1000多RMB的彩色预染Marker 效果差别不大

作者: bohe221 时间: 2014-6-21 17:35

对，我也觉得碧云天的预染MARKER不错，我现在就在用，效果很好，才100多，每次上10微升，很清晰。

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