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标题: [求助]关于--荧光量子产率--测定的具体问题求解！！！ [打印本页]

作者: teddy 时间: 2014-6-21 19:42 标题: [求助]关于--荧光量子产率--测定的具体问题求解！！！

关于--荧光量子产率--测定的具体问题求解！！！
公式：Y1/Y2=F1/F2*A2/A1
其中：F是产物的最大激发波长下的发射面积积分？如我的产物是300激发的，就是在300激发下测产物和硫酸奎宁的发射求其积分面积？
A是在紫外300（如我的产物是300激发的，它最大吸收波长也是300）下的产物和硫酸奎宁的吸光度，且其值都不超过0.05？有人和我说是产物和硫酸奎宁分别其最大吸收峰的吸光度不超过0.05，然后这两个浓度去测荧光。。。可是这样算出来量子产率超过1了，而且很大很大。。。

我测了两次，可是值都很大，肿么办？荧光量子产率是该在0.1--1之间的吧？是不是越接近1越好？

求好心人帮忙，很急。。。

作者: 艰苦奋斗 时间: 2014-6-21 19:44

你这是单点测量，误差太大。
你把公式变换一下，就会发现右边是Y1/Y2=(F1/A1)/(F2/A2) * (n1/n2）^2
这就是会分别出现样品和参比的积分面积/吸收值的斜率了。但是样品和参比都要配置一系列不同的浓度，并且吸收值都要小于0.05才可以，最好事0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05这样的五个或者六个吸收值。当然小于0.1的也有做的，误差会大些。
系列吸收值得样品会有系列的积分面积，excel画图求出斜率。参比也同样的做法。这样公式右边的值都可以求出。折射率n1和n2分别对应样品溶剂和参比溶剂的折射率，可以查百度或者文献得到。
如果样品与参比的吸收接近，那就最好采取使他们的交点的吸收小于0.05时对应的波长，用这个波长做激发，这样公式就会简化，公式右边的A1与A2就相同而抵消掉，只剩下积分面积之比。这样可以减少误差。
如果做不到这点，就用样品的最强激发峰波长做激发，参比物用参比物的告知量子产率的条件中的激发波长做激发。这两个激发如果接近就误差小，如果不接近，可能误差会比较大。

作者: 风往尘香 时间: 2014-6-21 19:45

补充：我的硫酸是1N的，即0.5mol/L，产物溶于乙醇

作者: adg 时间: 2014-6-21 19:50

觉得你的问题好混乱。。。
你是测单一浓度之比？
荧光量子产率的公式貌似还是对的。但是测法不对吧
你应该是一个物质，有4-6组浓度，吸光度0.1-0.01之间逐渐递减（当然0.05-0.01更好）。每一个浓度对应一个荧光的积分。然后算出斜率
两个物质的斜率再相比得出荧光量子产率

作者: ass 时间: 2014-6-21 19:50

为什么要算斜率？
我是先测紫外。吸光度在0.05以下，再用这个浓度去测荧光，求积分面积。就是这里，我弄混了：有人说这个吸光度是分别取待测物和硫酸奎宁的最大吸收峰处的。有人说是固定待测物最大吸收峰处的吸光度，这样才条件一致。。。
然后我就糊涂了。。。

作者: happydream 时间: 2014-6-21 19:51

..算斜率才能减少误差要不误差很大的
还有就是吸光度的选取。比如说你的化合物吸收峰280-320 假设硫酸奎宁300-340. 你选取的荧光激发波长应该是这2个峰的交点是最好的。

作者: iop 时间: 2014-6-21 19:51

不懂，你是说F1/F2直接用斜率比值来算了吗？
“比如说你的化合物吸收峰280-320 假设硫酸奎宁300-340. 你选取的荧光激发波长应该是这2个峰的交点是最好的。”啊？？？为什么？我测紫外发现奎宁在200nm、250nm左右有两个大的峰，而400nm左右有个很小的峰。我的产物是在240左右，390左右有两个峰，我现在用的是390nm激发的。。。
额，还有哈，那个硫酸的浓度是0.1mol/L、还是0.5mol/L（1N）？

谢谢，麻烦你了。

作者: jiankufanhan 时间: 2014-6-21 19:52

…奎宁吸收400其他都是溶剂你是不是选错了吸收值

作者: jiushi 时间: 2014-6-21 19:53

？？？奎宁吸收400，奎宁的吸收峰是400？我看了文献，有人说它在250、350有吸收峰啊？
我就是在390nm下，令待测物和奎宁的吸光度相近且小于0.05，然后拿这两个浓度去测荧光，算积分。。。

对了，你还没说，你是说F1/F2直接用斜率比值来算了吗？
那个硫酸的浓度是0.1mol/L、还是0.5mol/L（1N）？

作者: nmn 时间: 2014-6-21 19:53

我得跟你说清楚点才行
奎宁的吸收是多少我不知道，因为你拿奎宁来测紫外，是根据测出来的数据来算荧光量子产率。如果奎宁的吸收是250 350的话，你的化合物是390，那奎宁根本不适合用于测你的化合物的荧光量子产率。因为他们的吸收值没有交集。
若硫酸奎宁的吸收，确实是400，那么这个化合物就适合于你的化合物的荧光量子产率的测定，但是你应该查的是硫酸奎宁的荧光量子产率。

然后是斜率，每个浓度对应一个紫外吸收值和荧光强度的积分。只有积分和吸收值之比才是所谓的量子产率，因为化合物吸收了多少的光，发出了多少荧光。这就是你为什么要要算斜率的原因。你只有一组数据是算不出斜率的

作者: shuishui 时间: 2014-6-21 19:54

我主要目的是为了显示待测物和硫酸奎宁的吸收峰。
另外实验时浓度选择是务必使两个药物吸光度相近且在0.05附近。

作者: vbnm 时间: 2014-6-21 19:55

你好好看看吧，浓度大点选择350左右的二个峰交叉那个波长来测吧。
比如350nm 就用350nm的吸收去激发荧光

作者: teddy 时间: 2014-6-21 19:56

我仔细研究了下，终于知道为什么您一直要强调斜率了。。。额，有些文献上的公式不一样，我再按这个试试看，可是我看到还有要溶剂的折射率，这个直接网上查吗？
还有，稀释硫酸奎宁的硫酸浓度是0.5mol/L（1N）还是0.05mol/L（0.1N）?这个浓度不同折射率也不一样的吧？我看百度上说它折光率1.418（没写浓度），乙醇1.36，倒是有篇文献测不同浓度的折光率，在1.3X徘徊。。。

作者: 艰苦奋斗 时间: 2014-6-21 19:56

溶剂折射率小木虫上估计也有资料的。对于你说硫酸这个我就不大确定了。

作者: 风往尘香 时间: 2014-6-21 19:57

好的，O(∩_∩)O谢谢！

作者: adg 时间: 2014-6-21 19:57

我昨天测了，刚处理完数据，结果能接受，一个样品我测了3次，第三次测了39个荧光数据，5555，幸好结果出来了，不然我要暴起了。。。O(∩_∩)O谢谢您给予的指导！！！

作者: ass 时间: 2014-6-21 19:58

你这是单点测量，误差太大。
你把公式变换一下，就会发现右边是Y1/Y2=(F1/A1)/(F2/A2) * (n1/n2）^2
这就是会分别出现样品和参比的积分面积/吸收值的斜率了。但是样品和参比都要配置一系列不同的浓度，并且吸收值都要小于0.05才可以，最好事0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05这样的五个或者六个吸收值。当然小于0.1的也有做的，误差会大些。
系列吸收值得样品会有系列的积分面积，excel画图求出斜率。参比也同样的做法。这样公式右边的值都可以求出。折射率n1和n2分别对应样品溶剂和参比溶剂的折射率，可以查百度或者文献得到。
如果样品与参比的吸收接近，那就最好采取使他们的交点的吸收小于0.05时对应的波长，用这个波长做激发，这样公式就会简化，公式右边的A1与A2就相同而抵消掉，只剩下积分面积之比。这样可以减少误差。
如果做不到这点，就用样品的最强激发峰波长做激发，参比物用参比物的告知量子产率的条件中的激发波长做激发。这两个激发如果接近就误差小，如果不接近，可能误差会比较大。

作者: happydream 时间: 2014-6-21 19:59

O(∩_∩)O谢谢，本来像给你点金币酬谢的，可是我增加了，你这里却没有发金币的。。。

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