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标题: 【求助】BSA标准曲线的制定 [打印本页]

作者: xevin 时间: 2014-6-21 21:26 标题: 【求助】BSA标准曲线的制定

用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线，怎么也做不出来！4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别，还出现浓度越大，吸光值越小的现象，真是令我哭笑不得，请高手指点，谢谢！

作者: milkdog 时间: 2014-6-21 21:29

为什么不用个盒子呢？我感觉pierce本身提供的曲线蛮好的，我做的和他差不多

作者: baidukk 时间: 2014-6-21 21:45

我用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线，怎么也做不出来！4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别，还出现浓度越大，吸光值越小的现象，真是令我哭笑不得，请高手指点，谢谢！

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你设定的不同BSA浓度差别不大，所以吸光度也不会相差很多；
你测得浓度越大，吸光值越小，可能是由于放置时间久了，因为放置较久的试剂产生的光吸收值较低。
用考染法测蛋白浓度作BSA标准曲线时，最好是每个浓度作2~3次重复，相同浓度的BSA测完OD值后取平均值作曲线。如果用同一个比色杯来测定蛋白质浓度，则应当先测量低蛋白浓度的样品，避免因Bradford染料吸附而带来误差。
测量时间最好不要过长，加完Bradford染液后应在30min内测完所有BSA及待测样品的OD值。

作者: bangqi_k 时间: 2014-6-21 21:46

你的BSA浓度太高了！
G250的线性范围应该在0.01mg/ml到1mg/ml,
做的时候稀释过了么？

作者: hold住 时间: 2014-6-21 21:48

同意楼上的看法,我也要做,但资料中BSA的浓度最大是40ug/ml,明天做了告诉你!

作者: dreaming 时间: 2014-6-21 21:49

就是浓度太大了

作者: dragonkilly 时间: 2014-6-21 21:51

我觉得还是Bradford法好一些

作者: cbou876 时间: 2014-6-21 21:51

是浓度太大了。你也可能用酶联仪测定。

作者: qqshepherd 时间: 2014-6-21 21:53

G-250的测定蛋白的浓度大到一定程度时候，不成线性关系。浓度一定要适中

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