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标题: 【求助】SDS电泳时的条件 [打印本页]

作者: standbyme 时间: 2014-6-25 17:36 标题: 【求助】SDS电泳时的条件

是不是跑电泳时把槽子放在4度冰箱里跑的啊？
我的跑出来蛋白条带老是糊掉，听他们说要放在冰上或者冰箱里跑，是不是啊？

作者: duoduo 时间: 2014-6-25 17:36

没有啊
我就是正常跑的啊
你用的是什么牌子的电泳仪啊?
我用的是六一厂的

作者: bamboo16 时间: 2014-6-25 17:36

没有啊
我就是正常跑的啊
你用的是什么牌子的电泳仪啊?
我用的是六一厂的

作者: tuuu2 时间: 2014-6-25 17:37

应该是胶的问题,我们实验室都是在室温电泳的,条带挺清楚的

作者: leifengta 时间: 2014-6-25 17:37

是不是忘记加SDS了？

作者: u234 时间: 2014-6-25 17:42

请讲一下你的电泳条件，大家分析一下

作者: standbyme 时间: 2014-6-25 17:43

我的电泳仪型号是上海博通BDY-2型，电泳槽是AUTTO公司的，按照版子里战友的方子配的胶和电泳缓冲液，但是跑的时间就是要长很多！前一次把槽子放在4度冰箱里跑，结果同样的蛋白量跑出来的条带颜色明显浅很多。
我怀疑是电泳仪的问题，因为我把它设成是恒压的结果倒是恒流的，设成恒流的结果电压电流一直都在变。我要用恒流的，所以就调成恒压的跑……晕啊！

作者: u234 时间: 2014-6-25 17:43

因为我把它设成是恒压的结果倒是恒流的，设成恒流的结果电压电流一直都在变。我要用恒流的，所以就调成恒压的跑……晕啊！
根据你以上的叙述，估计是电泳仪功率与电泳槽不配套。不知道你在哪里，如果在北京，可以PM我，帮你看看。

作者: glass 时间: 2014-6-25 17:43

除非跑Tricine胶这种大功率的电泳（电压×电流）可以在4度电泳，
低温时SDS容易析出。还是电泳条件和胶的问题。

作者: standbyme 时间: 2014-6-25 17:44

我在南京啊，不在北京。
电泳的条件如下：
5*电泳缓冲液300ml：tris 4.53g,甘氨酸 28.3g,10%SDS 15ml,配置成300ml，并调ph为8.3.
12% 分离胶15ml:水 4.9ml,30%acr-bis 6.0ml,1.5Mtris-cl(ph8.8) 3.8ml,10%SDS 0.15ml,10%ap 0.15ml,TEMED 0.006ML.
5%浓缩胶5ml：水 3.4ml,30%acr-bis 0.83ml,1.0MTris-cl(ph6.8) 0.63ml,10%SDS 0.05ML,10%AP 0.05ml,TEMED 0.005ml.
用的恒流20mA，要跑四个小时左右，放在4度冰箱里结果跑了四个半小时，与放在室温条件相比，同样的蛋白量跑出来的条带颜色明显浅很多。
请各位高手帮忙啊！

作者: 小野花 时间: 2014-6-25 17:44

是不是低温跑的蛋白带比正常的亮度要小啊

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