标题:
【求助】请教各位专家评价我的2D-gel图
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作者:
寻梅
时间:
2014-6-27 11:20
标题:
【求助】请教各位专家评价我的2D-gel图
请教!
各位专家看一下我的这两张电泳图,有什么问题?如何解决?一张图纵条纹太多,还有蛋白斑点好像拉不到前沿,是什么问题?如何解决?
谢谢!
图片附件:
96291905.jpg
(2014-6-27 11:20, 43.86 KB) / 该附件被下载次数 3
http://bbs.antpedia.com/attachment.php?aid=25285
作者:
wmp1234
时间:
2014-6-27 11:21
我觉得你的一向应该没有问题,二向电泳时多跑一段时间蛋白就会拉开到前沿。不知你二向是什么条件,我的使用伯乐系统恒压进行的。
作者:
3648755
时间:
2014-6-27 11:22
我觉得你的图不错。作双向不要把图看得那么重要,能满足要求就好。关键得完成后续的分析检测等研究。
如果非要改进也就是有些点又拖痕(不是大面积的),如果不是关键点就不要计较了。
这些拖痕应该和点的蛋白量有关,也有可能与蛋白的稳定性有关,控制温度因该可以改善。
其实我看过的一些文献里的图可不如你的。:)
作者:
寻梅
时间:
2014-6-27 11:23
多谢!我也是使用伯乐系统恒压进行的.
作者:
wmp1234
时间:
2014-6-27 11:23
我想知道你的银染为什么是这种颜色?我的是微黄色,而且背景挺深的!
作者:
wmp1234
时间:
2014-6-27 11:24
有个问题想问问版主,今晚刚上的时候还是3分怎么现在就变成2分了?我要是有什么问题至少也要给个理由吧!做人要厚道!
作者:
yonger
时间:
2014-6-27 11:25
请先学习置顶的版规和发帖规范再按照格式发帖。
你不学习版规,不按格式发帖,已经因此耗费了别人有限的精力和时间来提醒和纠正,也不便于其他战友的浏览。
遇到问题,请先从自己本身找原因。
丁香园那么多战友,每天蛋白版发贴200多,版主都有自己的工作,不可能个个提醒!
另外,学习版规前,请先到新手成长版好好学习论坛的使用,不要急于到专业版块找个答案了事,循序渐进,这样才能真正提高。
谢谢支持
以下为不规范帖链接:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=6023904&sty=3')
作者:
ladyhuahua
时间:
2014-6-27 11:25
二向用恒流,20mA/胶 40分钟;30mA/胶 至结束。
你的上样量是多少?拖痕可能是上样过大或是蛋白降解的问题
作者:
ladyhuahua
时间:
2014-6-27 11:26
银染的颜色一般是棕色,但是根据蛋白量的不同会有一些不同,我自己试验中有时发现蛋白过多时甚至出现反显的表现,就是看上去似乎有点透明了,但你可以从边缘看出其实蛋白量蛮高的。
背景深我觉得主要的原因是增敏后水洗,以及银染后水洗的程度不够所致,Protocol里洗的时间和次数对具体的实验不一定是最优的,举个例来说,24 cm的胶和13 cm的胶洗的时间就不一样,我的经验是胶越大,洗得应该更充分结果才会理想,但是银染那一步的洗涤要注意,洗过了很可能导致染不出点,因为银染是染表面的。你在实验中应该注意观察一下,增敏洗涤后加入银染液是否溶液会变色,如果变了说明洗涤肯定是不充分的。这是我的经验,供你参考,希望你成功!
作者:
xue258
时间:
2014-6-27 11:27
我觉得您的这张胶有一点聚焦过度了,蛋白点有明显的被挤压的感觉,聚焦过度也会有短的竖纹
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